论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 基因符号表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-35页 |
| 1.1 链霉菌概述 | 第15-19页 |
| 1.1.1 链霉菌的基本特征 | 第15页 |
| 1.1.2 链霉菌的发育分化 | 第15-16页 |
| 1.1.3 链霉菌的次级代谢 | 第16-17页 |
| 1.1.4 链霉菌基因组特征 | 第17-19页 |
| 1.2. 抗生素简介 | 第19-24页 |
| 1.2.1 抗生素的分类及作用机制 | 第19-20页 |
| 1.2.2 抗生素生物合成概述 | 第20-24页 |
| 1.2.2.1 抗生素生物合成基因簇的特点 | 第20页 |
| 1.2.2.2 PKS类生物合成基因簇 | 第20-23页 |
| 1.2.2.3 NRPS类生物合成基因簇 | 第23-24页 |
| 1.3 核苷肽类抗生素 | 第24-33页 |
| 1.3.1 尼可霉素 | 第24-28页 |
| 1.3.2 多氧霉素 | 第28-31页 |
| 1.3.3 杂合核苷肽类抗生素polynikA | 第31-33页 |
| 1.4 组合生物合成及合成生物学对抗生素生物合成的改造 | 第33-35页 |
| 1.4.1 组合生物合成在抗生素生物合成改造中的应用 | 第33-34页 |
| 1.4.2 合成生物学在抗生素生物合成改造中的作用 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-65页 |
| 2.1 材料 | 第35-46页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及引物 | 第35-38页 |
| 2.1.2 培养基 | 第38-40页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第40-43页 |
| 2.1.4 蛋白分析相关试剂 | 第43-44页 |
| 2.1.5 抗生素使用浓度 | 第44-45页 |
| 2.1.6 实验试剂 | 第45页 |
| 2.1.7 实验仪器 | 第45-46页 |
| 2.2 方法 | 第46-65页 |
| 2.2.1 质粒的提取 | 第46-47页 |
| 2.2.1.1 大肠杆菌质粒的快速提取 | 第46页 |
| 2.2.1.2 碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第46-47页 |
| 2.2.1.3 Tiangen试剂盒小量提取大肠杆菌质粒 | 第47页 |
| 2.2.2 感受态细胞的制备和转化 | 第47-48页 |
| 2.2.2.1 氯化钙法 | 第47-48页 |
| 2.2.2.2 电击转化法 | 第48页 |
| 2.2.3 链霉菌-大肠杆菌接合转移 | 第48-49页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第49-50页 |
| 2.2.5 RNA提取及cDNA文库制备 | 第50-52页 |
| 2.2.5.1 总RNA的提取 | 第50页 |
| 2.2.5.2 RNA样品中基因组DNA污染的清除 | 第50-51页 |
| 2.2.5.3 RNA浓度和纯度的检测 | 第51页 |
| 2.2.5.4 cDNA文库的制备 | 第51-52页 |
| 2.2.6 基因片段合成-LCR法 | 第52-53页 |
| 2.2.7 基因片段的组装---Gibson等温一步法 | 第53-54页 |
| 2.2.8 PCR扩增体系 | 第54-55页 |
| 2.2.9 DNA纯化试剂盒回收DNA片段 | 第55页 |
| 2.2.10 PCR targeting | 第55页 |
| 2.2.11 Knock-in法在大肠杆菌中组装polynik A核苷基团生物合成功能模块. | 第55-62页 |
| 2.2.12 Gibson法组装用于链霉菌异源优化表达的nikkomycin Cz生物合成功能模块 | 第62-64页 |
| 2.2.13 尼可霉素核苷基团的HPLC分析 | 第64-65页 |
| 第三章 用于大肠杆菌优化表达的polynik A核苷基团生物合成功能模块的构建及表达测试 | 第65-83页 |
| 3.1 引言 | 第65-68页 |
| 3.2 结果与分析 | 第68-83页 |
| 3.2.1. 合成模块的优化设计,元件合成及拼接组装 | 第68-76页 |
| 3.2.1.1 sanQ基因的敲入及验证 | 第69-71页 |
| 3.2.1.2 sanRFA基因的敲入及验证 | 第71-72页 |
| 3.2.1.3 sanB1B2基因的敲入及验证 | 第72-73页 |
| 3.2.1.4 sanC基因的敲入及验证 | 第73页 |
| 3.2.1.5 sanDX基因的敲入及验证 | 第73-74页 |
| 3.2.1.6 araC-polT7基因的敲入 | 第74-76页 |
| 3.2.2 polynik A核苷基团生物合成功能模块表达的转录水平检测 | 第76-77页 |
| 3.2.3 功能模块表达的蛋白水平检测 | 第77-79页 |
| 3.2.4 目标化合物-核昔基团的合成检测 | 第79-83页 |
| 第四章 用于在链霉菌异源优化表达的nikkomycin Cz生物合成功能模块的构建及表达测试 | 第83-90页 |
| 4.1 前言 | 第83-84页 |
| 4.2 结果与分析 | 第84-90页 |
| 4.2.1 合成模块的Gibson法组装 | 第84-85页 |
| 4.2.2 链霉菌异源受体中尼可霉素Cz功能模块表达的转录水平检测 | 第85-87页 |
| 4.2.3 核苷基团(Cz组份)的生物合成产物检测 | 第87-90页 |
| 总结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
