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广泛调控因子Ms6564结合DNA关键氨基酸残基及其识别碱基的鉴定

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广泛调控因子Ms6564结合DNA关键氨基酸残基及其识别碱基的鉴定
论文目录
 
中文摘要第1-7页
ABSTRACT第7-8页
缩略语第8-9页
1 前言第9-19页
  1.1 结核分枝杆菌转录调控的研究现状第9-10页
  1.2 耻垢分枝杆菌的模式生物学地位第10-11页
  1.3 TetR家族转录因子第11-15页
    1.3.1 转录因子的分类第11-13页
    1.3.2 TetR家族转录因子第13页
    1.3.3 TetR家族转录因子的构象及结合DNA的性质第13-15页
  1.4 耻垢分枝杆菌转录因子Ms6564研究现状第15-17页
    1.4.1 Ms6564是一个广泛调控的TetR家族转录因子第15-16页
    1.4.2 Ms6564调控大量与细胞周期和DNA损伤修复相关的基因第16页
    1.4.3 Ms6564负调控细菌的突变频率和突变率第16-17页
  1.5 本课题研究的目的与意义第17页
  1.6 本课题的主要研究内容第17-19页
2 材料和方法第19-33页
  2.1 材料第19-24页
    2.1.1 菌株第19页
    2.1.2 抗生素第19-20页
    2.1.3 酶、试剂和试剂盒第20页
    2.1.4 质粒第20-21页
    2.1.5 引物及寡核甘酸序列第21页
    2.1.6 培养基、试剂、缓冲液的配置第21-24页
      2.1.6.1 LB培养基(1000 m1)的配置第21页
      2.1.6.27 H9培养基(1000 m1)的配置第21页
      2.1.6.3 琼脂糖凝胶相关试剂的配置第21-22页
      2.1.6.4 蛋白纯化、透析及SDS-PAGE相关试剂的配置第22-23页
      2.1.6.5 EMSA试剂的配置第23页
      2.1.6.6 ChIP相关试剂的配置第23-24页
  2.2 方法第24-33页
    2.2.1 定点突变第24-25页
    2.2.2 突变体及截短基因片段的克隆第25-26页
    2.2.3 含6×His标签的蛋白质的诱导表达及纯化第26-28页
    2.2.4 蛋白质的透析第28页
    2.2.5 凝胶阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)第28-29页
    2.2.6 染色质免疫共沉淀实验(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)第29-30页
    2.2.7 RNA的抽提第30-31页
    2.2.8 实时荧光定量PCR(Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR,qRT-PCR)第31-33页
3 结果与分析第33-47页
  3.1 Ms6564结合DNA的关键氨基酸残基是第47位Lys第33-41页
    3.1.1 耻垢分枝杆菌Ms6564相关突变体和截短基因片段的克隆第33-37页
    3.1.2 耻垢分枝杆菌Ms6564相关突变体蛋白和截短蛋白的表达纯化第37-39页
    3.1.3 EMSA实验证实Ms6564结合DNA的关键氨基酸残基是第47位Lys第39-41页
  3.2 Ms6564结合DNA的Motif是GXCXXTXCGXCXXGXC第41-43页
    3.2.1 DNA突变体的设计第41-42页
    3.2.2 EMSA实验表明Ms6564可能结合一个Motif:GXCXXTXCGXCXXGXC第42-43页
  3.3 Ms6564能够结合34个靶启动子且调控靶基因的表达第43-47页
    3.3.1 ChIP实验证明Ms6564能够结合34个靶启动子第43-44页
    3.3.2 qRT-PCR实验证明Ms6564能够调控30个靶基因的表达第44-47页
4 总结与讨论第47-50页
  4.1 总结第47页
  4.2 讨论第47-50页
参考文献第50-57页
致谢第57-58页
附录第58-65页

本篇论文共65页,点击这进入下载页面
 
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