猪瘟病毒E0蛋白在酵母系统和哺乳动物细胞系统中的表达与鉴定

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猪瘟病毒E0蛋白在酵母系统和哺乳动物细胞系统中的表达与鉴定

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猪瘟病毒E0蛋白在酵母系统和哺乳动物细胞系统中的表达与鉴定

论文目录
摘要	第1-5页
Abstract	第5-9页
1 文献综述	第9-26页
1.1 CSFV病毒粒子的结构及理化性质	第10-12页
1.2 CSFV基因组编码蛋白及其功能	第12-15页
1.2.1 C蛋白	第12页
1.2.2 E0蛋白	第12-13页
1.2.3 E1蛋白	第13页
1.2.4 E2蛋白	第13-14页
1.2.5 非结构蛋白	第14-15页
1.3 CSFV的致病机理	第15-16页
1.4 CSFV的诊断技术与疫苗研制	第16-18页
1.4.1 CSFV的实验室诊断技术	第16-17页
1.4.2 CSFV的疫苗研制	第17-18页
1.5 CSF的防治与控制	第18-19页
1.6 巴斯德毕赤酵母表达系统的特点及应用前景	第19-22页
1.7 哺乳动物细胞表达系统的特点及应用前景	第22-24页
1.8 本课题的研究目的和意义	第24-26页
2 猪瘟病毒E0蛋白在毕赤酵母表达系统中的表达	第26-54页
2.1 材料	第26-29页
2.1.1 菌种、载体和血清	第26页
2.1.2 仪器	第26-27页
2.1.3 试验试剂	第27-29页
2.2 试验所需培养基和溶液的配置	第29-32页
2.2.1 培养基	第29页
2.2.2 发酵产物处理液	第29页
2.2.3 琼脂糖凝胶电泳所用试剂	第29-30页
2.2.4 SDS-PAGE蛋白电泳所用试剂	第30-31页
2.2.5 Weastern-Blotting所用试剂	第31页
2.2.6 间接ELISA所用试剂	第31-32页
2.3 方法	第32-41页
2.3.1 猪瘟病毒E0基因的扩增	第32-33页
2.3.2 表达载体的构建与鉴定	第33-35页
2.3.3 重组酵母的构建及筛选	第35-38页
2.3.4 重组酵母的发酵	第38-39页
2.3.5 表达产物的SDS-PAGE和Western-Blotting鉴定	第39-40页
2.3.6 表达产物的浓缩和过滤	第40页
2.3.7 表达产物的纯化	第40-41页
2.3.8 ELISA鉴定纯化蛋白的反应原性	第41页
2.4 结果与分析	第41-51页
2.4.1 目的基因的获取与PCR鉴定	第41-42页
2.4.2 目的基因与载体连接产物的鉴定	第42-44页
2.4.3 重组酵母的构建及筛选	第44-46页
2.4.4 筛选子的菌落PCR鉴定	第46-47页
2.4.5 表达产物的SDS-PAGE鉴定	第47-49页
2.4.6 表达产物的Western-Blotting鉴定	第49-50页
2.4.7 纯化蛋白的ELISA鉴定	第50-51页
2.5 讨论	第51-54页
2.5.1 表达系统和表达载体的选择	第51-52页
2.5.2 猪瘟病毒E0基因在毕赤酵母表达系统中的整合和筛选	第52页
2.5.3 E0蛋白在毕赤酵母中的表达条件及表达方式	第52-54页
3 猪瘟病毒E0蛋白在哺乳动物表达系统中的表达	第54-67页
3.1 材料	第54页
3.1.1 细胞及质粒	第54页
3.1.2 工具酶及试剂	第54页
3.1.3 仪器及设备	第54页
3.2 试验所需溶液及培养基的配制	第54-55页
3.2.1 DMEM培养基的配制	第54-55页
3.2.2 冻存液的配制	第55页
3.2.3 灭活的胎牛血清	第55页
3.2.4 G418储存液的配制	第55页
3.3 方法	第55-61页
3.3.1 猪瘟病毒E0基因的扩增	第55-56页
3.3.2 重组质粒的构建和鉴定	第56-58页
3.3.3 重组质粒的转化和筛选	第58-61页
3.3.4 观察目的蛋白的表达情况	第61页
3.4 结果与讨论	第61-65页
3.4.1 载体的构建	第61-64页
3.4.2 E0基因表达产物的检测	第64-65页
3.5 讨论	第65-67页
4 结论	第67-68页
参考文献	第68-74页
附录英文缩写词汇表	第74-76页
个人简历	第76-77页
致谢	第77页

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