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β-木糖苷酶基因的克隆与重组表达及其酶学性质研究
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β-木糖苷酶基因的克隆与重组表达及其酶学性质研究
论文目录
摘要
第1-5页
Abstract
第5-11页
第一章 绪论
第11-21页
1 本课题的研究背景
第11-19页
1.1 β-木糖苷酶的简介
第11页
1.2 β-木糖苷酶的来源
第11-12页
1.3 β-木糖苷酶的分类
第12页
1.4 β-木糖苷酶的结构
第12-13页
1.5 β-木糖苷酶昀催化机制
第13页
1.6 β-木糖苷酶的分离纯化
第13-14页
1.7 β-木糖苷酶的活性检测
第14页
1.8 β-木糖苷酶的酶学性质
第14-15页
1.9 β-木糖苷酶基因克隆的研究进展
第15-16页
1.10 β-木糖苷酶基因的克隆方法
第16-17页
1.11 β-木糖苷酶的应用
第17-19页
2. 研究的思路及意义
第19-21页
2.1 研究思路
第19-20页
2.2 研究意义
第20-21页
第二章 目的基因的克隆
第21-32页
1 实验材料
第21-23页
1.1 供试菌株与质粒
第21-22页
1.2 实验仪器
第22-23页
1.3 试剂与酶
第23页
1.4 试剂配制
第23页
2 试验方法
第23-28页
2.1 引物设计
第23-24页
2.2 基因组提取
第24-26页
2.3 PCR产物纯化
第26页
2.4 目的基因的克隆
第26-27页
2.5 测序结果分析
第27-28页
3 结果与分析
第28-30页
3.1 黑曲霉基因组的提取结果
第28页
3.2 目的基因扩增结果
第28-29页
3.3 目的基因的克隆及测序验证结果
第29页
3.4 测序结果及分析
第29-30页
4 本章小结
第30-32页
第三章 β-木糖苷酶基因的原核表达
第32-40页
1 实验材料
第33页
2 试验方法
第33-36页
2.1 引物设计
第33页
2.2 克隆质粒及表达质粒pET32a的提取
第33-34页
2.3 目的基因的PCR扩增
第34页
2.4 载体及目的基因的双酶切及胶回收
第34页
2.5 酶切片段的连接
第34-35页
2.6 连接产物转化E.coli DH5α感受态细胞
第35页
2.7 重组质粒的验证
第35-36页
2.8 重组质粒电转E.coli BL2I(DE3)感受态细胞
第36页
2.9 蛋白在E.coli BL21中的表达
第36页
3 结果与分析
第36-39页
3.1 目的基因的PCR结果
第36-37页
3.2 质粒及目的基因双酶切结果
第37页
3.3 重组质粒的验证结果
第37-38页
3.4 蛋白在E.coli BL21中的表达结果
第38-39页
4 本章小结
第39-40页
第四章 β-木糖苷酶基因的真核表达
第40-64页
1 实验材料
第41页
2 实验方法
第41-50页
2.1 引物的设计
第41-42页
2.2 克隆质粒及表达质粒pPICZαA的提取
第42页
2.3 目的基因的PCR扩增
第42页
2.4 载体及目的基因的双酶切及胶回收
第42-43页
2.5 酶切片段的连接及转化
第43页
2.6 重组子的鉴定
第43页
2.7 重组子的线性化
第43-44页
2.8 酵母感受态细胞制备
第44页
2.9 重组表达载体的转化
第44-45页
2.10 重组毕赤酵母菌株的PCR快速鉴定
第45页
2.11 重组酵母菌株的诱导表达
第45-46页
2.12 酶活检测
第46-47页
2.13 高酶活菌株筛选
第47页
2.14 表达条件优化
第47-50页
2.15 蛋白纯化
第50页
3 结果与分析
第50-63页
3.1 目的基因的扩增结果
第50页
3.2 目的基因及质粒pPICZαA载体的双酶切结果
第50-51页
3.3 重组子的鉴定结果
第51-52页
3.4 重组质粒的线性化结果
第52页
3.5 重组酵母的PCR快速鉴定结果
第52-53页
3.6 酶活检测结果
第53页
3.7 高酶活菌株的筛选结果
第53-54页
3.8 表达条件优化结果
第54-62页
3.9 蛋白纯化结果
第62-63页
4 本章小结
第63-64页
第五章 结论与讨论
第64-66页
1 总结
第64页
2 创新点
第64-65页
3 展望
第65-66页
附录
第66-69页
参考文献
第69-77页
致谢
第77页
本篇论文共
77
页,
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