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β-木糖苷酶基因的克隆与重组表达及其酶学性质研究

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β-木糖苷酶基因的克隆与重组表达及其酶学性质研究
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-11页
第一章 绪论第11-21页
1 本课题的研究背景第11-19页
  1.1 β-木糖苷酶的简介第11页
  1.2 β-木糖苷酶的来源第11-12页
  1.3 β-木糖苷酶的分类第12页
  1.4 β-木糖苷酶的结构第12-13页
  1.5 β-木糖苷酶昀催化机制第13页
  1.6 β-木糖苷酶的分离纯化第13-14页
  1.7 β-木糖苷酶的活性检测第14页
  1.8 β-木糖苷酶的酶学性质第14-15页
  1.9 β-木糖苷酶基因克隆的研究进展第15-16页
  1.10 β-木糖苷酶基因的克隆方法第16-17页
  1.11 β-木糖苷酶的应用第17-19页
  2. 研究的思路及意义第19-21页
  2.1 研究思路第19-20页
  2.2 研究意义第20-21页
第二章 目的基因的克隆第21-32页
1 实验材料第21-23页
  1.1 供试菌株与质粒第21-22页
  1.2 实验仪器第22-23页
  1.3 试剂与酶第23页
  1.4 试剂配制第23页
2 试验方法第23-28页
  2.1 引物设计第23-24页
  2.2 基因组提取第24-26页
  2.3 PCR产物纯化第26页
  2.4 目的基因的克隆第26-27页
  2.5 测序结果分析第27-28页
3 结果与分析第28-30页
  3.1 黑曲霉基因组的提取结果第28页
  3.2 目的基因扩增结果第28-29页
  3.3 目的基因的克隆及测序验证结果第29页
  3.4 测序结果及分析第29-30页
4 本章小结第30-32页
第三章 β-木糖苷酶基因的原核表达第32-40页
1 实验材料第33页
2 试验方法第33-36页
  2.1 引物设计第33页
  2.2 克隆质粒及表达质粒pET32a的提取第33-34页
  2.3 目的基因的PCR扩增第34页
  2.4 载体及目的基因的双酶切及胶回收第34页
  2.5 酶切片段的连接第34-35页
  2.6 连接产物转化E.coli DH5α感受态细胞第35页
  2.7 重组质粒的验证第35-36页
  2.8 重组质粒电转E.coli BL2I(DE3)感受态细胞第36页
  2.9 蛋白在E.coli BL21中的表达第36页
3 结果与分析第36-39页
  3.1 目的基因的PCR结果第36-37页
  3.2 质粒及目的基因双酶切结果第37页
  3.3 重组质粒的验证结果第37-38页
  3.4 蛋白在E.coli BL21中的表达结果第38-39页
4 本章小结第39-40页
第四章 β-木糖苷酶基因的真核表达第40-64页
1 实验材料第41页
2 实验方法第41-50页
  2.1 引物的设计第41-42页
  2.2 克隆质粒及表达质粒pPICZαA的提取第42页
  2.3 目的基因的PCR扩增第42页
  2.4 载体及目的基因的双酶切及胶回收第42-43页
  2.5 酶切片段的连接及转化第43页
  2.6 重组子的鉴定第43页
  2.7 重组子的线性化第43-44页
  2.8 酵母感受态细胞制备第44页
  2.9 重组表达载体的转化第44-45页
  2.10 重组毕赤酵母菌株的PCR快速鉴定第45页
  2.11 重组酵母菌株的诱导表达第45-46页
  2.12 酶活检测第46-47页
  2.13 高酶活菌株筛选第47页
  2.14 表达条件优化第47-50页
  2.15 蛋白纯化第50页
3 结果与分析第50-63页
  3.1 目的基因的扩增结果第50页
  3.2 目的基因及质粒pPICZαA载体的双酶切结果第50-51页
  3.3 重组子的鉴定结果第51-52页
  3.4 重组质粒的线性化结果第52页
  3.5 重组酵母的PCR快速鉴定结果第52-53页
  3.6 酶活检测结果第53页
  3.7 高酶活菌株的筛选结果第53-54页
  3.8 表达条件优化结果第54-62页
  3.9 蛋白纯化结果第62-63页
4 本章小结第63-64页
第五章 结论与讨论第64-66页
1 总结第64页
2 创新点第64-65页
3 展望第65-66页
附录第66-69页
参考文献第69-77页
致谢第77页

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