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棉花(Gossypium hirsutum)PYL基因的分离与鉴定

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棉花(Gossypium hirsutum)PYL基因的分离与鉴定
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-13页
一、前言第13-22页
  1.1 ABA的合成、分解与转运第13-16页
    1.1.1 ABA的合成与分解代谢第13-14页
    1.1.2 ABA的跨膜运输第14-16页
  1.2 ABA信号通路第16-20页
    1.2.1 ABA受体第17-18页
    1.2.2 ABA信号通路中的PYL蛋白第18-19页
    1.2.3 ABA信号通路中的A类PP2C蛋白和SnRK2蛋白第19-20页
  1.3 立题依据及研究意义第20-22页
二、材料与方法第22-27页
  2.1 实验材料第22-23页
    2.1.1 植物材料第22页
    2.1.2 菌株与载体第22页
    2.1.3 工具酶第22页
    2.1.4 常用贮存液第22-23页
    2.1.5 常用试剂盒第23页
    2.1.6 常用培养基第23页
    2.1.7 常用仪器设备第23页
  2.2 实验方法第23-27页
    2.2.1 GhPYL基因序列的分离第23-24页
    2.2.2 GhPYLs和AtPYLs的多序列比对与同源进化分析第24页
    2.2.3 GhPYL基因的表达分析第24页
    2.2.4 酵母双杂交实验第24页
    2.2.5 拟南芥的培养、遗传转化及阳性苗的鉴定第24-25页
    2.2.6 野生型与转基因拟南芥的萌发率、绿苗率统计第25页
    2.2.7 野生型和转基因拟南芥的根长统计第25页
    2.2.8 GhPYL12蛋白的原核诱导表达及纯化第25-26页
    2.2.9 过量表达和RNAi转基因棉花的创建第26-27页
三、实验结果第27-56页
  3.1 GhPYL基因的分离第27-28页
  3.2 GhPYL蛋白的进化分析与序列比对第28-31页
    3.2.1 棉花PYL蛋白与拟南芥PYL蛋白的同源进化分析第28-29页
    3.2.2 棉花PYL蛋白与AtPYR1蛋白的多重序列比对第29-31页
  3.3 GhPYL基因的表达分析第31-33页
    3.3.1 GhPYL基因的组织表达第31-32页
    3.3.2 GhPYL基因在干旱胁迫下的表达分析第32-33页
  3.4 棉花PYL蛋白与PP2C蛋白在酵母细胞中的相互作用第33-35页
  3.5 过量表达GhPYL转基因拟南芥的创建第35-37页
    3.5.1 GhPYL的过量表达载体的构建及农杆菌转化第35-36页
    3.5.2 过量表达GhPYL转基因拟南芥的阳性苗鉴定第36-37页
  3.6 过量表达GhPYL转基因拟南芥对ABA的敏感性分析第37-43页
    3.6.1 过量表达GhPYL10转基因拟南芥对ABA的敏感性分析第38-40页
    3.6.2 过量表达GhPYL26转基因拟南芥对ABA的敏感性分析第40-42页
    3.6.3 过量表达GhPYL12转基因拟南芥对ABA的敏感性分析第42-43页
  3.7 过量表达GhPYL转基因拟南芥对NaCl的敏感性分析第43-47页
    3.7.1 过量表达GhPYL10的转基因拟南芥对NaCl的敏感性分析第43-45页
    3.7.2 过量表达GhPYL26的转基因拟南芥对NaCl的敏感性分析第45-46页
    3.7.3 过量表达GhPYL12的转基因拟南芥对NaCl的敏感性分析第46-47页
  3.8 过量表达GhPYL转基因拟南芥对甘露醇的敏感性分析第47页
  3.9 过量表达GhPYL转基因拟南芥根长分析第47-50页
  3.10 GhPYL1蛋白的亚细胞定位第50-51页
  3.11 GhPYL12蛋白的原核诱导表达及纯化第51-53页
    3.11.1 带His标签的GhPYL12融合蛋白的原核表达与纯化第51-52页
    3.11.2 带MBP标签的GhPYL12融合蛋白的原核表达与纯化第52-53页
  3.12 GhPYL12的棉花转化和继代培养第53-56页
    3.12.1 GhPYL12过量表达载体及RNAi载体的构建第53-54页
    3.12.2 GhPYL12转基因棉花的继代培养第54-56页
四、讨论第56-61页
  4.1 GhPYL蛋白的结构分析和进化分析第56页
  4.2 部分GhPYL在棉花受到干旱胁迫后呈下调表达第56-57页
  4.3 棉花PYL蛋白与PP2C蛋白的相互作用第57-58页
  4.4 GhPYL转基因拟南芥的表型分析第58-61页
    4.4.1 过量表达GhPYL增加了拟南芥在种子萌发和幼苗生长时期对ABA的敏感性第58-59页
    4.4.2 过量表达GhPYL增加了拟南芥在种子萌发和幼苗生长时期对盐胁迫的敏感性第59页
    4.4.3 过量表达GhPYL12或GhPYL26促进了拟南芥在幼苗时期主根的生长第59-61页
参考文献第61-67页
附录第67-68页
攻读学位期间发表的学术论文第68-69页
致谢第69页

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