论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 提高外源基因在转基因作物中表达的策略 | 第12-17页 |
| 1.1.1 启动子的选择 | 第12-14页 |
| 1.1.1.1 组成型启动子 | 第12-13页 |
| 1.1.1.2 组织特异性启动子 | 第13-14页 |
| 1.1.1.3 诱导型启动子 | 第14页 |
| 1.1.2 添加合适的表达调控元件 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1 5’UTR序列 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 内含子 | 第15页 |
| 1.1.2.3 核基质结合区 | 第15-16页 |
| 1.1.2.4 信号肽 | 第16页 |
| 1.1.3 优化外源基因密码子 | 第16-17页 |
| 1.2 提高转基因植物标记基因安全性策略 | 第17-19页 |
| 1.2.1 利用无争议的安全标记基因 | 第17-18页 |
| 1.2.2 剔除抗性标记基因 | 第18-19页 |
| 1.2.3 最小表达框直接转化植物 | 第19页 |
| 1.3 本研究中所涉及的基因 | 第19-24页 |
| 1.3.1 抗病抗逆相关基因 | 第19-23页 |
| 1.3.1.1 GPA1 | 第19-20页 |
| 1.3.1.2 乳铁蛋白 | 第20页 |
| 1.3.1.3 核糖体蛋白 | 第20-21页 |
| 1.3.1.4 几丁质酶 | 第21页 |
| 1.3.1.5 抗菌肽 | 第21-23页 |
| 1.3.2 抗体融合蛋白 | 第23页 |
| 1.3.3 脱毒基因 | 第23-24页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 培养基 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 PCR扩增 | 第26页 |
| 2.2.1.1 Easy Taq酶扩增 | 第26页 |
| 2.2.1.2 LA Taq高保真酶扩增 | 第26页 |
| 2.2.1.3 KOD-Plus高保真酶扩增 | 第26页 |
| 2.2.1.4 农杆菌菌体PCR | 第26页 |
| 2.2.2 T4 DNA连接酶连接目的片段和载体 | 第26-27页 |
| 2.2.3 Klenow酶补平片段粘端 | 第27页 |
| 2.2.4 质粒DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.4.1 试剂盒提取质粒DNA | 第27页 |
| 2.2.4.2 煮沸法提取质粒DNA | 第27-28页 |
| 2.2.5 试剂盒回收DNA片段 | 第28页 |
| 2.2.6 感受态细胞制备及转化 | 第28-30页 |
| 2.2.6.1 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第28页 |
| 2.2.6.2 农杆菌GV3101感受态细胞的制备及转化 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-65页 |
| 3.1 小麦表达载体的构建 | 第30-45页 |
| 3.1.1 抗病抗逆相关基因的克隆 | 第30-33页 |
| 3.1.1.1 BLF和amt启动子的全基因合成 | 第30页 |
| 3.1.1.2 抗菌肽ACE、D4E1、EXD4E1及Lfcin B的扩增 | 第30-31页 |
| 3.1.1.3 功能基因GPA1和Hvchi的克隆 | 第31页 |
| 3.1.1.4 抗体基因5’端添加Linker | 第31-32页 |
| 3.1.1.5 SOE扩增抗体相关融合蛋白 | 第32-33页 |
| 3.1.2 CaMV35S启动子的改造 | 第33-36页 |
| 3.1.3 组织特异性启动子amt和lem1连入基因枪转化载体pXJC | 第36页 |
| 3.1.4 基因枪转化载体的构建 | 第36-42页 |
| 3.1.4.1 含amt启动子表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.4.2 含cmps启动子表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.1.4.3 含lem1启动子表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.1.4.4 含lem2启动子表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.1.4.5 含Q35S启动子表达载体的构建 | 第40页 |
| 3.1.4.6 含ubi启动子表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.1.4.7 含vp1启动子表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.5 农杆菌转化载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.1.5.1 报告基因连入单边界农杆菌转化载体pTR-BAR | 第42页 |
| 3.1.5.2 抗病抗逆相关基因连入双边界农杆菌转化载体pTR-LYB | 第42-44页 |
| 3.1.6 小麦表达载体转化根癌农杆菌 | 第44-45页 |
| 3.2 拟南芥转化载体的构建 | 第45-59页 |
| 3.2.1 脱毒基因或脱毒蛋白-抗体融合基因表达载体的构建 | 第45-50页 |
| 3.2.1.1 全基因合成 | 第45页 |
| 3.2.1.2 伏马菌素脱毒基因-抗体融合蛋白双表达框载体的构建 | 第45-49页 |
| 3.2.1.3 黄曲霉解毒基因-抗体融合蛋白表达载体的构建 | 第49页 |
| 3.2.1.4 解毒基因Epo、NHTD相关表达载体 | 第49-50页 |
| 3.2.2 抗菌肽、抗体相关载体的构建 | 第50-54页 |
| 3.2.2.1 抗菌肽-抗体融合蛋白相关载体的构建 | 第50-53页 |
| 3.2.2.2 单链抗体表达载体的构建 | 第53页 |
| 3.2.2.3 抗菌肽表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.2.3 报告基因相关表达载体的构建 | 第54-57页 |
| 3.2.3.1 含GUS基因的表达载体构建 | 第54页 |
| 3.2.3.2 受体蛋白-GFP融合蛋白表达载体的构建 | 第54-57页 |
| 3.2.4 拟南芥表达载体转化根癌农杆菌 | 第57-59页 |
| 3.3 构建的植物表达载体总结列表 | 第59-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
