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拟南芥GAAP1与其互作因子相互作用的初步分析

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拟南芥GAAP1与其互作因子相互作用的初步分析
论文目录
 
摘要第1-8页
abstract第8-14页
第一章 综述第14-25页
一、GAAP1(Golgi anti-apoptotic protein 1)与植物细胞程序性死亡(PCD)第14-20页
  1. 细胞凋亡第14-18页
  1.1 细胞凋亡的主要分子机制第14-15页
  1.2 ER-stress和细胞凋亡第15-17页
  1.3 细胞抗凋亡因子第17页
  1.4 细胞凋亡与植物生长发育第17-18页
  2. GAAP在细胞凋亡中的作用第18-20页
二、蛋白质与蛋白质相互作用及其研究方法第20-24页
  1. 蛋白质与蛋白质相互作用第20-21页
  2. 研究蛋白质相互作用的方法第21-24页
  2.1 免疫共沉淀法第21页
  2.2 荧光共定位法第21-22页
  2.3 GST-Pull down法第22-23页
  2.4 酵母双杂交法第23-24页
  2.5 其他方法第24页
三、本课题研究的目的及意义第24-25页
第二章 研究内容第25-63页
第一节 GAAP1与潜在互作因子相互作用的验证第25-45页
  1. 前言第25-26页
  2. 材料与方法第26-33页
  2.1 质粒和菌株第26-27页
  2.2 酶和试剂第27页
  2.3 pMon530-eYFP-GAAP1克隆及农杆菌菌株的构建第27-28页
    2.3.1 pMon530-eYFP-GAAP1克隆的构建第27页
    2.3.2 pMon530-eYFP-GAAP1农杆菌菌株的构建及鉴定第27-28页
  2.4 pMon530-eYFP-AtWLIM2b克隆及农杆菌菌株的构建第28-29页
    2.4.1 目的片段的获得第28页
    2.4.2 pMon530-eYFP-AtWLIM2b克隆的构建第28页
    2.4.3 pMon530-eYFP-AtWLIM2b农杆菌菌株的构建及鉴定第28-29页
  2.5 pHB-X-YFP、pHB-CFP-X和pHB-X-CFP克隆及农杆菌菌株的构建第29-30页
    2.5.1 pHB-GAAP1-YFP/CFP克隆及农杆菌的构建第29页
    2.5.2 pHB-AtWLIM2b-YFP/CFP克隆及农杆菌的构建第29页
    2.5.3 pHB-MAPR3-YFP/CFP、pHB-CFP-MAPR3克隆及农杆菌的构建第29-30页
  2.6 pM530-TAP-X克隆及农杆菌菌株的构建第30-31页
  2.7 荧光共定位观察第31页
  2.8 GST-pull down第31-33页
  3. 实验结果第33-44页
  3.1 GAAP1与AtWLIM2b,MAPR3和PAS荧光定位分析第33-40页
    3.1.1 GAAP1、AtWLIM2b和MAPR3与各种荧光蛋白融合表达克隆的构建第33-36页
    3.1.2 GAAP1与AtWLIM2b,MAPR3和PAS共定位分析第36-40页
  3.2 AtWLIM2b、PAS和MAPR3与GAAP1相互作用的体外GST-Pulldown验证第40-44页
    3.2.1 AtWLIM2b-TAP、PAS-TAP、MAPR3-TAP和GST-GAAP1表达克隆的构建第40-42页
    3.2.2 GST-GAAP1重组蛋白体外表达与纯化第42-44页
    3.2.3 AtWLIM2b-TAP、PAS-TAP和MAPR3-TAP与GST-GAAP1结合的GST-Pull down的验证第44页
  4. 本节小结第44-45页
第二节 拟南芥GAAP1互作因子缺失突变体的构建及功能分析第45-63页
  1. 前言第45页
  2. 材料与方法第45-47页
  2.1 实验材料第45-46页
  2.2 实验方法第46-47页
    2.2.1 植物材料培养与处理第46-47页
    2.2.2 eYFP-GAAP1、eYFP-AtWLIM2b和eYFP拟南芥稳定转化子构建及鉴定第47页
    2.2.3 荧光共聚焦显微镜观察第47页
  3. 实验结果第47-61页
  3.1 eYFP-GAAP1和eYFP-AtWLIM2b拟南芥稳定转化子中荧光定位的观察第47-52页
    3.1.1 eYFP-GAAP1和AtWLIM2b-eYFP拟南芥稳定转化子的构建第47-50页
    3.1.2 GAAP1-eYFP和AtWLIM2b-eYFP稳定转化子荧光定位观察第50-52页
  3.2 T-DNA插入突变体的鉴定第52-54页
  3.3 Atwlim2b-1的NaCl、TM和DTT敏感性分析第54-57页
  3.4 MAPR3突变对拟南芥生长发育和对DTT的敏感性影响的分析第57-58页
  3.5 Atwlim2b-1/gaap1双突变体纯合子拟南芥的构建第58-59页
  3.6 Atwlim2b-1/gaap1双突变体发育和DTT敏感性分析第59-61页
  4. 本节小结第61-63页
全文总结与讨论第63-65页
附录第65-78页
附录1 实验方法第65-73页
附录2 缩略词表第73-75页
附录3 试验所用引物序列第75-76页
附录4 所用大肠杆菌菌种编号第76-77页
附录5 攻读硕士期间参与的科研项目和取得的成果第77-78页
参考文献第78-83页
致谢第83页

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