论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-34页 |
| 1. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素污染 | 第14-19页 |
| 1.1 毒素危害的概述 | 第14页 |
| 1.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的污染 | 第14-15页 |
| 1.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的产生影响因素 | 第15页 |
| 1.4 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的结构与理化性质 | 第15-16页 |
| 1.5 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性机理 | 第16-18页 |
| 1.5.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇急性毒性作用 | 第16页 |
| 1.5.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇慢性毒性作用 | 第16-17页 |
| 1.5.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的致畸、致突变、致癌作用 | 第17页 |
| 1.5.4 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的细胞毒性作用 | 第17-18页 |
| 1.5.5 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的免疫毒性与联合毒性作用 | 第18页 |
| 1.6 脱氧雪腐镰刀菌烯醇与人类疾病的关系 | 第18-19页 |
| 1.7 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的限量标准 | 第19页 |
| 2. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的分离与检测技术 | 第19-23页 |
| 2.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的提取 | 第19页 |
| 2.2 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的净化 | 第19-20页 |
| 2.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检测方法 | 第20-23页 |
| 2.3.1 生物学检测方法 | 第20页 |
| 2.3.2 物理化学检测法 | 第20-22页 |
| 2.3.2.1 薄层色谱法(thin-layer chomatography,TLC) | 第21页 |
| 2.3.2.2 气相色谱法(gaschomatography,GC) | 第21-22页 |
| 2.3.2.3 高效液相色谱法(high performance liquid chomatography,HPLC) | 第22页 |
| 2.3.3 酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) | 第22-23页 |
| 3. 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的脱毒技术 | 第23-26页 |
| 3.1 物理方法 | 第23-24页 |
| 3.1.1 漂洗 | 第23页 |
| 3.1.2 热加工 | 第23-24页 |
| 3.1.3 离子辐照 | 第24页 |
| 3.1.4 无机吸附 | 第24页 |
| 3.2 化学方法 | 第24-25页 |
| 3.2.1 碱处理 | 第24页 |
| 3.2.2 氧化剂的氧化作用 | 第24-25页 |
| 3.2.3 还原剂作用 | 第25页 |
| 3.3 生物方法 | 第25-26页 |
| 3.3.1 微生物的菌体吸附作用 | 第25页 |
| 3.3.2 微生物降解 | 第25-26页 |
| 4. 国内外对微生物去除脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的研究进展 | 第26-27页 |
| 5. 基因组文库在微生物中的应用 | 第27-31页 |
| 5.1 基因组文库概述 | 第27-28页 |
| 5.2 大片段基因组文库 | 第28-31页 |
| 5.2.1 Cosmid文库 | 第28页 |
| 5.2.2 Fosmid文库 | 第28-30页 |
| 5.2.3 BAC文库 | 第30页 |
| 5.2.4 大片段基因组文库在微生物研究中的应用 | 第30-31页 |
| 6. 本研究的目的 | 第31-34页 |
| 6.1 目前存在的问题 | 第31页 |
| 6.2 本研究的目的意义 | 第31-34页 |
| 第二章 降解菌DDS-1产3-AC-DON氧化酶的酶学特性研究 | 第34-52页 |
| 第一节 降解菌DDS-1产3-AC-DON氧化酶酶液反应体系的建立 | 第34-44页 |
| 1. 材料与方法 | 第34-38页 |
| 1.1 材料 | 第34-35页 |
| 1.1.1 菌种来源 | 第34页 |
| 1.1.2 培养基及试剂 | 第34-35页 |
| 1.2 实验仪器 | 第35页 |
| 1.3 方法 | 第35-38页 |
| 1.3.1 DDS-1种子液的制备 | 第35页 |
| 1.3.2 粗酶液的制备 | 第35页 |
| 1.3.3 粗酶液的纯化 | 第35-36页 |
| 1.3.4 酶活力测定方法 | 第36页 |
| 1.3.5 标准曲线 | 第36-37页 |
| 1.3.6 DON与3-AC-DON含量的计算方法 | 第37页 |
| 1.3.7 Devosia sp.DDS-1最适产酶条件 | 第37-38页 |
| 2. 结果与讨论 | 第38-43页 |
| 2.1 标准曲线的制作及线性关系 | 第38-39页 |
| 2.2 3-AC-DON降解酶的反应进程曲线与酶浓度曲线 | 第39-40页 |
| 2.3 硫酸铵饱和度的确定 | 第40-41页 |
| 2.4 菌株最适产酶条件 | 第41-43页 |
| 2.4.1 培养时间对DDS-1生长和产酶的影响 | 第41-42页 |
| 2.4.2 pH值对DDS-1生长和产酶的影响 | 第42页 |
| 2.4.3 培养温度对DDS-1生长和产酶的影响 | 第42-43页 |
| 2.4.4 最佳产酶条件的优化 | 第43页 |
| 3. 结论 | 第43-44页 |
| 第二节 降解菌DDS-1产3-AC-DON氧化酶的特性研究 | 第44-52页 |
| 1. 材料与方法 | 第44-46页 |
| 1.1 菌株、培养基、试剂及仪器 | 第44页 |
| 1.2 方法 | 第44页 |
| 1.2.1 DDS-1种子液的制备 | 第44页 |
| 1.2.2 粗酶液的制备 | 第44页 |
| 1.3 酶活力的测定 | 第44页 |
| 1.4 酶学性质的初步研究 | 第44-45页 |
| 1.4.1 温度对酶活的影响 | 第44-45页 |
| 1.4.2 pH对酶活的影响 | 第45页 |
| 1.4.3 酶的热稳定性 | 第45页 |
| 1.4.4 酶的酸碱稳定性 | 第45页 |
| 1.4.5 金属离子和EDTA对酶活的影响 | 第45页 |
| 1.5 3-AC-DON毒素氧化酶的定域试验 | 第45页 |
| 1.6 DDS-1粗酶液对小麦中DON,3-AC-DON,15-AC-DON的降解 | 第45-46页 |
| 2. 结果与分析 | 第46-50页 |
| 2.1 酶学性质 | 第46-49页 |
| 2.1.1 温度对酶活的影响 | 第46页 |
| 2.1.2 pH对酶活的影响 | 第46-49页 |
| 2.2 酶的定域试验 | 第49-50页 |
| 2.3 DDS-1粗酶液对小麦中DON,3-AC-DON,15-AC-DON的降解 | 第50页 |
| 3. 讨论 | 第50页 |
| 4. 结论 | 第50-52页 |
| 第三章 降解菌DDS-1基因组FOSMID文库构建 | 第52-70页 |
| 第一节 降解菌DDS-1基因组总DNA的提取 | 第52-57页 |
| 1. 材料与方法 | 第52-56页 |
| 1.1 材料 | 第52-54页 |
| 1.1.1 菌种来源 | 第52页 |
| 1.1.2 培养基及试剂 | 第52-54页 |
| 1.1.3 仪器 | 第54页 |
| 1.2 方法 | 第54-56页 |
| 1.2.1 基因组DNA提取 | 第54-56页 |
| 1.2.2 电泳检测 | 第56页 |
| 2. 结果与分析 | 第56-57页 |
| 第二节 降解菌DDS-1基因组FOSMID文库构建 | 第57-70页 |
| 1. 材料与方法 | 第57-63页 |
| 1.1 材料 | 第57-58页 |
| 1.1.1 菌种来源 | 第57页 |
| 1.1.2 培养基及试剂 | 第57页 |
| 1.1.3 仪器 | 第57-58页 |
| 1.2 方法 | 第58-63页 |
| 1.2.1 Fosmid文库构建流程 | 第58-61页 |
| 1.2.2 文库质量鉴定及评价 | 第61-62页 |
| 1.2.3 Fosmid克隆的PCR验证 | 第62-63页 |
| 2. 结果 | 第63-67页 |
| 2.1 合适片段DNA的制备 | 第63页 |
| 2.2 DNA片段回收 | 第63-64页 |
| 2.3 包装物滴度计算 | 第64页 |
| 2.4 文库质量鉴定 | 第64-66页 |
| 2.4.1 重组率、插入片段大小及文库覆盖度分析 | 第64-65页 |
| 2.4.2 Fosmid克隆稳定性鉴定 | 第65-66页 |
| 2.5 Fosmid克隆的PCR验证 | 第66-67页 |
| 3. 讨论 | 第67-70页 |
| 全文总结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
