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植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶的克隆表达以及酶性质的初步研究
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植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶的克隆表达以及酶性质的初步研究
论文目录
摘要
第1-7页
ABSTRACT
第7-16页
英文缩略词表
第16-18页
第一章 绪论
第18-37页
1.1 GABA概述
第18-30页
1.1.1 GABA的理化性质
第19-20页
1.1.2 GABA的自然分布
第20页
1.1.3 GABA代谢
第20-21页
1.1.4 γ-氨基丁酸的生理机能
第21-25页
1.1.5 γ-氨基丁酸应用
第25-27页
1.1.6 γ-氨基丁酸的制备
第27-30页
1.2 谷氨酸脱羧酶概述
第30-34页
1.2.1 谷氨酸脱羧酶的生化性质
第30页
1.2.2 哺乳类动物及人来源谷氨酸脱羧酶
第30-31页
1.2.3 植物来源谷氨酸脱羧酶
第31-32页
1.2.4 微生物来源谷氨酸脱羧酶
第32-33页
1.2.5 昆虫来源谷氨酸脱羧酶
第33-34页
1.3 研究目的和意义
第34-36页
1.4 实验路线
第36-37页
第二章 谷氨酸脱羧酶基因的克隆
第37-64页
2.1 引言
第37页
2.2 实验材料
第37-41页
2.2.1 实验仪器
第37-38页
2.2.2 菌种及质粒
第38-39页
2.2.3 工具酶与试剂盒
第39页
2.2.4 培养基
第39-40页
2.2.5 试剂
第40-41页
2.3 实验方法
第41-51页
2.3.1 GABA的测定
第41-44页
2.3.2 高产GABA植物乳杆菌的筛选
第44-45页
2.3.3 植物乳杆菌来源的GAD基因的克隆
第45-51页
2.3.4 序列测定及分析
第51页
2.4 结果与讨论
第51-62页
2.4.1 GABA浓度的测定
第51-54页
2.4.2 高产GABA植物乳杆菌的筛选
第54-55页
2.4.3 Lb.plantarum YM-4-3由来GAD基因克隆
第55-62页
2.5 本章小结
第62-64页
第三章 植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶的表达纯化
第64-84页
3.1 引言
第64页
3.2 实验材料
第64-65页
3.2.1 分子生物学试剂盒与工具酶
第64页
3.2.2 生化试剂
第64页
3.2.3 实验培养基
第64-65页
3.2.4 实验仪器
第65页
3.3 实验方法
第65-75页
3.3.1 pET28a-gad表达载体的构建
第65-68页
3.3.2 谷氨酸脱羧酶的蛋白表达
第68-69页
3.3.3 聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)
第69-71页
3.3.4 目的蛋白的大规模表达和纯化
第71-74页
3.3.5 GAD粗酶活力测定
第74页
3.3.6 蛋白含量的测定
第74-75页
3.4 结果与讨论
第75-82页
3.4.1 E.coli BL21/pET28a-gad谷氨酸脱羧酶表达工程菌构建
第75-81页
3.4.2 重组谷氨酸脱羧酶的纯化
第81-82页
3.5 本章小结
第82-84页
第四章 植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶酶性质的初步研究
第84-92页
4.1 引言
第84页
4.2 实验材料
第84-85页
4.2.1 实验仪器
第84-85页
4.2.2 实验试剂
第85页
4.3 GAD酶性质的初步研究
第85-86页
4.3.1 温度对酶活力的影响
第85页
4.3.2 pH对酶活力的影响
第85-86页
4.3.3 辅酶PLP对酶活力的影响
第86页
4.3.4 菌株E.coli BL21/pET28a-gad的生长曲线
第86页
4.4 结果与讨论
第86-91页
4.4.1 温度对酶活的影响
第86-88页
4.4.2 pH对酶活的影响
第88-89页
4.4.3 PLP对酶活的影响
第89-90页
4.4.4 E.coli BL21/pET28a-gad的生长曲线
第90-91页
4.5 本章小结
第91-92页
第五章 总结
第92-94页
5.1 高产GABA的植物乳杆菌的筛选及GAD基因克隆
第92页
5.2 GAD的表达纯化
第92页
5.3 GAD酶学性质的初步研究
第92-93页
5.4 展望
第93-94页
致谢
第94-95页
参考文献
第95-102页
附录A 攻读硕士期间发表论文目录
第102-103页
附录B 其他需要说明的内容
第103页
本篇论文共
103
页,
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