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植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶的克隆表达以及酶性质的初步研究

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植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶的克隆表达以及酶性质的初步研究
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-16页
英文缩略词表第16-18页
第一章 绪论第18-37页
  1.1 GABA概述第18-30页
    1.1.1 GABA的理化性质第19-20页
    1.1.2 GABA的自然分布第20页
    1.1.3 GABA代谢第20-21页
    1.1.4 γ-氨基丁酸的生理机能第21-25页
    1.1.5 γ-氨基丁酸应用第25-27页
    1.1.6 γ-氨基丁酸的制备第27-30页
  1.2 谷氨酸脱羧酶概述第30-34页
    1.2.1 谷氨酸脱羧酶的生化性质第30页
    1.2.2 哺乳类动物及人来源谷氨酸脱羧酶第30-31页
    1.2.3 植物来源谷氨酸脱羧酶第31-32页
    1.2.4 微生物来源谷氨酸脱羧酶第32-33页
    1.2.5 昆虫来源谷氨酸脱羧酶第33-34页
  1.3 研究目的和意义第34-36页
  1.4 实验路线第36-37页
第二章 谷氨酸脱羧酶基因的克隆第37-64页
  2.1 引言第37页
  2.2 实验材料第37-41页
    2.2.1 实验仪器第37-38页
    2.2.2 菌种及质粒第38-39页
    2.2.3 工具酶与试剂盒第39页
    2.2.4 培养基第39-40页
    2.2.5 试剂第40-41页
  2.3 实验方法第41-51页
    2.3.1 GABA的测定第41-44页
    2.3.2 高产GABA植物乳杆菌的筛选第44-45页
    2.3.3 植物乳杆菌来源的GAD基因的克隆第45-51页
    2.3.4 序列测定及分析第51页
  2.4 结果与讨论第51-62页
    2.4.1 GABA浓度的测定第51-54页
    2.4.2 高产GABA植物乳杆菌的筛选第54-55页
    2.4.3 Lb.plantarum YM-4-3由来GAD基因克隆第55-62页
  2.5 本章小结第62-64页
第三章 植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶的表达纯化第64-84页
  3.1 引言第64页
  3.2 实验材料第64-65页
    3.2.1 分子生物学试剂盒与工具酶第64页
    3.2.2 生化试剂第64页
    3.2.3 实验培养基第64-65页
    3.2.4 实验仪器第65页
  3.3 实验方法第65-75页
    3.3.1 pET28a-gad表达载体的构建第65-68页
    3.3.2 谷氨酸脱羧酶的蛋白表达第68-69页
    3.3.3 聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)第69-71页
    3.3.4 目的蛋白的大规模表达和纯化第71-74页
    3.3.5 GAD粗酶活力测定第74页
    3.3.6 蛋白含量的测定第74-75页
  3.4 结果与讨论第75-82页
    3.4.1 E.coli BL21/pET28a-gad谷氨酸脱羧酶表达工程菌构建第75-81页
    3.4.2 重组谷氨酸脱羧酶的纯化第81-82页
  3.5 本章小结第82-84页
第四章 植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶酶性质的初步研究第84-92页
  4.1 引言第84页
  4.2 实验材料第84-85页
    4.2.1 实验仪器第84-85页
    4.2.2 实验试剂第85页
  4.3 GAD酶性质的初步研究第85-86页
    4.3.1 温度对酶活力的影响第85页
    4.3.2 pH对酶活力的影响第85-86页
    4.3.3 辅酶PLP对酶活力的影响第86页
    4.3.4 菌株E.coli BL21/pET28a-gad的生长曲线第86页
  4.4 结果与讨论第86-91页
    4.4.1 温度对酶活的影响第86-88页
    4.4.2 pH对酶活的影响第88-89页
    4.4.3 PLP对酶活的影响第89-90页
    4.4.4 E.coli BL21/pET28a-gad的生长曲线第90-91页
  4.5 本章小结第91-92页
第五章 总结第92-94页
  5.1 高产GABA的植物乳杆菌的筛选及GAD基因克隆第92页
  5.2 GAD的表达纯化第92页
  5.3 GAD酶学性质的初步研究第92-93页
  5.4 展望第93-94页
致谢第94-95页
参考文献第95-102页
附录A 攻读硕士期间发表论文目录第102-103页
附录B 其他需要说明的内容第103页

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