论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-32页 |
| 1 海藻酸及其寡糖的研究进展 | 第16-24页 |
| 1.1 海藻酸结构、性质及用途 | 第16页 |
| 1.2 海藻酸寡糖的制备 | 第16-20页 |
| 1.3 海藻酸寡糖的生理活性 | 第20-24页 |
| 2 海藻酸裂解酶及其分子生物学研究 | 第24-27页 |
| 2.1 海藻酸裂解酶 | 第24-26页 |
| 2.2 海藻酸裂解酶基因的克隆与功能鉴定研究 | 第26-27页 |
| 2.3 海藻酸裂解酶的构-效关系研究 | 第27页 |
| 3. 真核表达系统的研究进展 | 第27-31页 |
| 3.1 昆虫杆状病毒表达系统 | 第28页 |
| 3.2 哺乳动物表达系统 | 第28页 |
| 3.3 酵母表达系统 | 第28-31页 |
| 4. 论文选题意义及研究内容 | 第31-32页 |
| 4.1 论文的选题意义 | 第31页 |
| 4.2 论文研究内容 | 第31-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-50页 |
| 2.1 材料 | 第32-36页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第32-33页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第33-36页 |
| 2.1.5 抗生素及其它试剂 | 第36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-50页 |
| 2.2.1 聚古罗糖醛酸和聚甘露糖醛酸的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.2 引物合成 | 第37-38页 |
| 2.2.3 Sphingomonas sp.ZH0基因组的提取 | 第38页 |
| 2.2.4 质粒的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.5 PCR条件 | 第39-40页 |
| 2.2.6 DNA电泳检测以及胶回收 | 第40-42页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 2.2.8 PCR的TA克隆 | 第43页 |
| 2.2.9 目的基因和表达载体的连接 | 第43-44页 |
| 2.2.10 毕赤酵母GS115电转化步骤 | 第44-45页 |
| 2.2.11 目的蛋白重组菌的产酶优化 | 第45-46页 |
| 2.2.12 蛋白含量的测定 | 第46-47页 |
| 2.2.13 SDS-PAGE | 第47-49页 |
| 2.2.14 目的蛋白的酶活检测及特性分析方法 | 第49-50页 |
| 第三章 实验结果 | 第50-95页 |
| 3.1 聚古罗糖醛酸和聚甘露糖醛酸的制备 | 第50页 |
| 3.2 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶基因zh0-Ⅰ的克隆、表达和重组酶性质研究 | 第50-62页 |
| 3.2.1 TA克隆载体pMD19-ZH0-Ⅰ的构建策略 | 第50-54页 |
| 3.2.2 真核表达载体pPIC9K-ZH0-Ⅰ的构建策略 | 第54-56页 |
| 3.2.3 重组酶ZH0-Ⅰ的表达 | 第56-59页 |
| 3.2.4 重组酶ZH0-Ⅰ的酶学性质 | 第59-62页 |
| 3.3 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶基因zh0-Ⅱ的克隆、表达和重组酶性质研究 | 第62-72页 |
| 3.3.1 TA克隆载体pMD19-ZH0-Ⅱ的构建策略 | 第62-64页 |
| 3.3.2 真核表达载体pPIC9K-ZH0-Ⅱ的构建策略 | 第64-66页 |
| 3.3.3 重组酶ZH0-Ⅱ的表达 | 第66-70页 |
| 3.3.4 重组酶ZH0-Ⅱ的酶学性质 | 第70-72页 |
| 3.4 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶基因zh0-Ⅲ的克隆、表达和重组酶性质研究 | 第72-83页 |
| 3.4.1 TA克隆载体pMD19-ZH0-Ⅲ的构建策略 | 第72-75页 |
| 3.4.2 真核表达载体pPIC9K-ZH0-Ⅲ的构建策略 | 第75-77页 |
| 3.4.3 重组酶ZH0-Ⅲ的表达 | 第77-80页 |
| 3.4.4 重组酶ZH0-Ⅲ的酶学性质 | 第80-83页 |
| 3.5 Sphingomonas sp.ZH0海藻酸裂解酶基因zh0-Ⅳ的克隆、表达和重组酶性质研究 | 第83-95页 |
| 3.5.1 TA克隆载体pMD19-ZH0-Ⅳ的构建策略 | 第83-87页 |
| 3.5.2 真核表达载体pPIC9K-ZH0-Ⅳ的构建策略 | 第87-88页 |
| 3.5.3 重组酶ZH0-Ⅳ的表达 | 第88-92页 |
| 3.5.4 重组酶ZH0-Ⅳ的酶学性质 | 第92-95页 |
| 第四章 讨论 | 第95-101页 |
| 4.1 重组毕赤酵母产酶条件优化 | 第95-96页 |
| 4.1.1 产酶pH的优化 | 第95页 |
| 4.1.2 产酶温度的优化 | 第95页 |
| 4.1.3 甲醇诱导浓度的优化 | 第95-96页 |
| 4.2 海藻酸裂解酶的重组表达 | 第96-98页 |
| 4.3 重组海藻酸裂解酶的酶学性质 | 第98-101页 |
| 4.3.1 重组酶的最适温度 | 第98页 |
| 4.3.2 重组酶的酸碱稳定性 | 第98-99页 |
| 4.3.3 重组酶的金属离子偏好 | 第99-100页 |
| 4.3.4 重组酶的底物特异性 | 第100-101页 |
| 第五章 总结与展望 | 第101-103页 |
| 5.1 总结 | 第101页 |
| 5.2 展望 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附录A：攻读硕士期间发表论文及申请专利目录 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-110页 |
