论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| 1.1 DNA的修饰现象 | 第13-14页 |
| 1.2 DNA硫修饰现象的发现 | 第14-16页 |
| 1.3 DNA硫修饰的化学本质以及特异性 | 第16-18页 |
| 1.4 DNA硫修饰相关基因的分析 | 第18-20页 |
| 1.5 DNA硫修饰相关蛋白质的分析 | 第20-22页 |
| 1.6 蛋白质结构生物学简介 | 第22-24页 |
| 1.7 蛋白质的纯化方法 | 第24-26页 |
| 1.7.1 蛋白质的亲和层析 | 第24-25页 |
| 1.7.2 蛋白质的离子交换层析 | 第25-26页 |
| 1.7.3 蛋白质的凝胶过滤层析 | 第26页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-47页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 试验材料 | 第29-31页 |
| 2.2.1 菌株 | 第29页 |
| 2.2.2 质粒 | 第29-30页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.3 引物序列 | 第31页 |
| 2.4 主要试剂的配制 | 第31-34页 |
| 2.4.1 培养基和化学试剂的配制 | 第31-33页 |
| 2.4.2 Ni~(2+)-NTA柱亲和层析、阴离子交换层析和Superdex 200分子筛层析的缓冲液配制 | 第33-34页 |
| 2.4.3 研究中所用抗生素 | 第34页 |
| 2.5 试验方法 | 第34-47页 |
| 2.5.1 引物的设计 | 第34-35页 |
| 2.5.2 引物的合成 | 第35页 |
| 2.5.3 引物的前期准备 | 第35页 |
| 2.5.4 目的基因的克隆 | 第35-36页 |
| 2.5.5 电泳检测PCR反应产物以及凝胶回收 | 第36-37页 |
| 2.5.6 目的基因和质粒的内切酶双酶切以及连接反应 | 第37-38页 |
| 2.5.7 转化感受态细胞 | 第38-39页 |
| 2.5.8 质粒的小规模抽取 | 第39-40页 |
| 2.5.9 目的蛋白的表达及可溶性检测 | 第40-42页 |
| 2.5.10蛋白质的Ni~(2+)-NTA柱亲和层析纯化 | 第42-43页 |
| 2.5.11蛋白质Source 15Q离子交换层析纯化 | 第43页 |
| 2.5.12蛋白质浓缩 | 第43-44页 |
| 2.5.13蛋白质的Superdex 200分子筛层析纯化 | 第44页 |
| 2.5.14蛋白晶体的筛选方法 | 第44-45页 |
| 2.5.15蛋白质的PVDF膜转膜实验 | 第45-47页 |
| 第三章 DndB蛋白的表达、纯化与结晶 | 第47-79页 |
| 3.1 Salm-DndB蛋白的表达纯化 | 第47-52页 |
| 3.1.1 Salm-Dnd B Ni~(2+)-NTA柱亲和层析纯化 | 第48-49页 |
| 3.1.2 TEV酶切除NusA标签 | 第49-50页 |
| 3.1.3 Salm-Dnd B Source 15Q阴离子交换层析纯化 | 第50-51页 |
| 3.1.4 Salm-Dnd B Superdex 200分子筛层析纯化 | 第51-52页 |
| 3.2 TEV酶的纯化 | 第52-54页 |
| 3.2.1 TEV酶的Ni~(2+)-NTA柱亲和层析纯化 | 第52-53页 |
| 3.2.2 TEV酶的Superdex 200分子筛层析 | 第53-54页 |
| 3.3 Salm-DndB蛋白晶体的筛选及优化 | 第54-57页 |
| 3.3.1 Salm-Dnd B蛋白结晶条件初筛 | 第54-55页 |
| 3.3.2 Salm-Dnd B蛋白晶体的优化 | 第55-57页 |
| 3.4 Salm-DndB蛋白的降解 | 第57-59页 |
| 3.5 Salm-DndB 1-171、172-361片段表达载体的构建 | 第59-66页 |
| 3.5.1 Salm-Dnd B 2 个降解条带质谱分析和N端测序 | 第59-64页 |
| 3.5.2 Salm-Dnd B 1-171、172-361表达载体构建 | 第64-66页 |
| 3.5.3 结果分析 | 第66页 |
| 3.6 Salm-DndB 1-312片段表达载体的构建 | 第66-71页 |
| 3.6.1 Salm-Dnd B FoldIndex蛋白折叠倾向性预测 | 第67-68页 |
| 3.6.2 Salm-Dnd B 1-312表达载体的构建 | 第68-71页 |
| 3.6.3 结果分析 | 第71页 |
| 3.7 Salm-DndB 54-361片段表达载体的构建 | 第71-74页 |
| 3.7.1 Salm-Dnd B蛋白序列同源性比对 | 第71-72页 |
| 3.7.2 Salm-Dnd B 54-361片段表达载体的构建 | 第72-73页 |
| 3.7.3 结果分析 | 第73-74页 |
| 3.8 Salm-DndB 108-361片段表达载体的构建 | 第74-77页 |
| 3.8.1 Salm-Dnd B 108-361 FoldIndex蛋白折叠倾向性预测 | 第74-75页 |
| 3.8.2 Salm-Dnd B 108-361表达载体的构建 | 第75-77页 |
| 3.8.3 结果分析 | 第77页 |
| 3.9 本章小结 | 第77-79页 |
| 第四章 DndA蛋白的表达纯化 | 第79-84页 |
| 4.1 Strep-DndA蛋白的表达纯化 | 第79-83页 |
| 4.1.1 Strep-DndA蛋白Ni~(2+)-NTA柱亲和层析纯化 | 第79-80页 |
| 4.1.2 凝血酶切除His-Strep-DndA蛋白中的组氨酸标签 | 第80-81页 |
| 4.1.3 Strep-DndA蛋白Superdex 200分子筛层析纯化 | 第81-82页 |
| 4.1.4 结果分析 | 第82-83页 |
| 4.2 本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 DndE蛋白的表达纯化 | 第84-88页 |
| 5.1 B7A-DndE蛋白的表达纯化 | 第84-87页 |
| 5.1.1 B7A-DndE蛋白Ni~(2+)-NTA柱亲和层析纯化 | 第84-85页 |
| 5.1.2 B7A-DndE蛋白Superdex 200分子筛层析纯化 | 第85-86页 |
| 5.1.3 结果分析 | 第86-87页 |
| 5.2 本章小结 | 第87-88页 |
| 第六章 总结与展望 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 攻读学位期间发表和接收的学术论文目录 | 第97页 |
