论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-20页 |
| 1.1 细胞穿膜肽的发展 | 第9-10页 |
| 1.2 细胞穿透肽：多功能的生物分子运输载体 | 第10-11页 |
| 1.3 细胞穿膜肽的分类 | 第11-12页 |
| 1.4 细胞穿膜肽的摄入方式及机制研究 | 第12-14页 |
| 1.5 影响细胞摄入机制的因素 | 第14页 |
| 1.6 细胞穿透肽运输寡核苷酸 | 第14-16页 |
| 1.7 细胞穿透肽的细胞内化机制 | 第16-20页 |
| 第二章 材料和方法 | 第20-23页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.1 酶与生物试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 培养基配方 | 第20页 |
| 2.1.3 大肠杆菌菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.1.4 动物细胞 | 第20页 |
| 2.1.5 细胞培养基 | 第20页 |
| 2.1.6 仪器与设备 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 寡核苷酸链与表达载体的重组构建 | 第21页 |
| 2.2.2 融合蛋白的表达纯化 | 第21页 |
| 2.2.3 Ni-NTA Agarose柱层析纯化 | 第21页 |
| 2.2.4 爬片制备 | 第21-22页 |
| 2.2.5 流式细胞术 | 第22页 |
| 2.2.6 其他 | 第22-23页 |
| 第三章 穿膜肽CS和CS4的穿膜机理研究 | 第23-47页 |
| 3.1 穿膜肽CS、CS4和TAT相关融合蛋白的构建及表达纯化 | 第23-29页 |
| 3.1.1 融合蛋白EGFP-CS、EGFP-CS4和EGFP-TAT的纯化 | 第23-25页 |
| 3.1.2 融合蛋白TAT-mCherry的构建及表达纯化 | 第25-29页 |
| 3.2 穿膜肽TAT、CS和CS4穿膜作用时间依赖性 | 第29-30页 |
| 3.3 穿膜肽TAT、CS和CS4穿膜作用浓度依赖性 | 第30-33页 |
| 3.3.1 激光共聚焦观察穿膜肽TAT、CS和CS4穿膜作用浓度依赖性 | 第30-32页 |
| 3.3.2 流式细胞术检测穿膜肽TAT、CS和CS4穿膜作用的浓度依赖性 | 第32-33页 |
| 3.4 不同抑制剂对穿膜肽TAT、CS和CS4穿膜作用的影响 | 第33-36页 |
| 3.5 穿膜肽CS携带大分子量货物蛋白的穿膜作用 | 第36-41页 |
| 3.5.1 重组质粒pET43.1-egfp-cs的构建 | 第36-39页 |
| 3.5.2 融合蛋白Nus-S Tag-EGFP-CS的表达及纯化 | 第39-40页 |
| 3.5.3 融合蛋白Nus-S Tag-EGFP-CS对细胞穿膜作用实验 | 第40-41页 |
| 3.5.4 结论 | 第41页 |
| 3.6 穿膜肽CS内吞途径研究 | 第41-42页 |
| 3.7 穿膜肽CS、CS4和TAT穿膜作用的细胞特异性 | 第42-47页 |
| 3.7.1 穿膜肽CS、CS4和TAT对HeLa细胞穿膜活性比较 | 第42-43页 |
| 3.7.2 穿膜肽CS、CS4和TAT对Bcap细胞穿膜活性比较 | 第43-44页 |
| 3.7.3 穿膜肽CS、CS4和TAT对A549细胞穿膜活性比较 | 第44页 |
| 3.7.4 穿膜肽CS、CS4和TAT对MKN细胞穿膜活性比较 | 第44页 |
| 3.7.5 穿膜肽CS、CS4和TAT对OK细胞穿膜活性比较 | 第44-45页 |
| 3.7.6 穿膜肽CS、CS4和TAT对CHO细胞穿膜活性比较 | 第45-46页 |
| 3.7.7 结论 | 第46-47页 |
| 第四章 不同人源性穿膜肽穿膜作用比较 | 第47-59页 |
| 4.1 不同人源性穿膜肽重组质粒的构建 | 第47-50页 |
| 4.1.1 重组质粒pET28a-egfp-tctp的构建 | 第47-48页 |
| 4.1.2 重组质粒pET28a-egfp-arf的构建 | 第48页 |
| 4.1.3 重组质粒pET28a-egfp-bagp的构建 | 第48页 |
| 4.1.4 重组质粒pET28a-egfp-cyt c的构建 | 第48页 |
| 4.1.5 重组质粒pET28a-egfp-hclock的构建 | 第48页 |
| 4.1.6 重组质粒pET28a-egfp-hct的构建 | 第48-49页 |
| 4.1.7 重组质粒pET28a-egfp-hlf的构建 | 第49页 |
| 4.1.8 重组质粒pET28a-egfp-hph的构建 | 第49页 |
| 4.1.9 重组质粒pET28a-egfp-nrtn的构建 | 第49-50页 |
| 4.2 不同人源性穿膜肽融合EGFP蛋白的表达 | 第50-55页 |
| 4.2.1 融合蛋白EGFP-TCTP的表达 | 第50页 |
| 4.2.2 融合蛋白EGFP-ARF的表达 | 第50-51页 |
| 4.2.3 融合蛋白EGFP-BagP的表达 | 第51-52页 |
| 4.2.4 融合蛋白EGFP-Cyt c的表达 | 第52页 |
| 4.2.5 融合蛋白EGFP-hClock的表达 | 第52-53页 |
| 4.2.6 融合蛋白EGFP-hCT的表达 | 第53-54页 |
| 4.2.7 融合蛋白EGFP-hLF的表达 | 第54页 |
| 4.2.8 融合蛋白EGFP-Hph的表达 | 第54-55页 |
| 4.2.9 融合蛋白EGFP-NRTN的表达 | 第55页 |
| 4.3 各人源性穿膜肽融合蛋白EGFP的纯化 | 第55-56页 |
| 4.4 各人源性穿膜肽对cos-7细胞穿膜作用比较 | 第56-58页 |
| 4.5 结论 | 第58-59页 |
| 第五章 总结 | 第59-60页 |
| 5.1 穿膜肽CS和CS4的穿膜机制研究 | 第59页 |
| 5.2 穿膜肽CS和CS4对细胞特异性的研究 | 第59页 |
| 5.3 穿膜肽携带大分子量物质的穿膜效率研究 | 第59页 |
| 5.4 不同人源性穿膜肽的穿膜作用比较 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
