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利用诱导重组删除系统培育无选择标记抗虫转基因水稻

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利用诱导重组删除系统培育无选择标记抗虫转基因水稻
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-9页
引言第9-10页
第一章 绪论第10-22页
  1.1 课题背景第10页
  1.2 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)的简述第10-12页
    1.2.1 Bt蛋白的分类及毒性第11页
    1.2.2 Bt蛋白的杀虫机制第11-12页
    1.2.3 Bt在农业生产中的应用第12页
  1.3 构建无选择标记的删除系统第12-20页
    1.3.1 直接转化法第14页
    1.3.2 共转化法第14-16页
      1.3.2.1 双质粒/双菌株系统第14-15页
      1.3.2.2 双质粒/单菌株系统第15页
      1.3.2.3 单质粒/单菌株系统第15-16页
    1.3.3 转座子介导策略第16页
    1.3.4 染色体内同源重组介导删除法第16-17页
    1.3.5 位点特异性系统介导删除法第17-19页
      1.3.5.1 FLP/FRT系统第17-18页
      1.3.5.2 R/RS系统第18页
      1.3.5.3 Cre/Lox P系统第18-19页
    1.3.6 化学诱导位点特异性重组系统第19-20页
  1.4 本研究目的及意义第20-22页
第二章 材料与方法第22-32页
  2.1 实验材料第22页
    2.1.1 供试水稻品种第22页
    2.1.2 菌株、质粒第22页
    2.1.3 主要试剂和仪器第22页
  2.2 实验方法第22-32页
    2.2.1 载体构建第23-25页
    2.2.2 农杆菌侵染转化在水稻第25-26页
    2.2.3 阳性转基因植株检测第26-29页
      2.2.3.1 水稻叶片组织DNA的PCR检测第26-28页
      2.2.3.2 水稻叶片组织RNA的PCR检测第28-29页
      2.2.3.3 试纸条法定性检测cry1Ab的表达第29页
    2.2.4 阳性转基因植株T_0代收种和T_1代种植第29-32页
      2.2.4.1 T_1代水稻叶片组织DNA的PCR检测第29-30页
      2.2.4.2 T1代水稻叶片组织RNA的PCR检测第30页
      2.2.4.3 试纸条法定性检测cry1Ab的表达第30页
      2.2.4.4 Elisa定性检测抗虫蛋白表达量第30-31页
      2.2.4.5 Southern Blot检测第31-32页
第三章 结果与分析第32-50页
  3.1 化学诱导重组系统表达载体的构建第32-35页
    3.1.1 转抗鳞翅目基因Cry1Ab化学诱导重组系统载体的构建第32-33页
    3.1.2 转抗鳞翅目基因Cry1Ah(m4)化学诱导重组系统载体的构建第33-34页
    3.1.3 转抗鳞翅目基因Cry1Ca化学诱导重组系统载体的构建第34页
    3.1.4 转抗同翅目基因Cry30Fa1化学诱导重组系统载体的构建第34-35页
  3.2 水稻转化以及分子检测第35-50页
    3.2.1 转化获取再生植株第35-36页
    3.2.2 T0代转化植株的分子检测第36-42页
      3.2.2.1 PCR检测第36-40页
      3.2.2.2 RT-PCR验证PCR检测结果第40-41页
      3.2.2.3 Cry1Ab试纸条检测转psc-Ab植株的cryAb的表达第41-42页
    3.2.3 转基因植株T_1代的分子检测及表达分析第42-45页
      3.2.3.1 发生删除的T_1代株系的PCR分析第42-45页
      3.2.3.2 RT-PCR检测抗虫基因转录第45页
    3.2.4 转pUXSHCLF-Ab载体T_1代植株的表达分析第45-46页
    3.2.5 Elisa定性检测T1代转基因植株中蛋白的表达第46-48页
    3.2.6 T1代转基因植株的Southern Blot第48-50页
第四章 讨论第50-52页
  4.1 转基因T_0、T_1代植株结果分析第50-51页
  4.2 下一步工作计划第51-52页
参考文献第52-58页
附录1第58页
附录2第58-59页
附录3第59-63页
附录4第63-64页
附录5第64-65页
附录6第65-69页
附录7第69-70页
附录8第70-75页
致谢第75页

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