论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| abstract | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 GAPDH蛋白的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 GAPDH简介 | 第11页 |
| 1.2.2 GAPDH的功能多样性 | 第11-13页 |
| 1.3 实时荧光定量PCR技术的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3.1 实时荧光定量PCR技术简介 | 第13页 |
| 1.3.2 荧光定量PCR的分类 | 第13-14页 |
| 1.3.3 实时荧光定量PCR技术的应用 | 第14页 |
| 1.4 植物启动子功能实验分析方法 | 第14-15页 |
| 1.5 RNAi技术在小麦中的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.5.1 RNAi的干扰技术路线 | 第15-16页 |
| 1.5.2 RNAi干扰技术在小麦中的应用 | 第16-19页 |
| 第二章 论文设计思路 | 第19-20页 |
| 2.1 立题依据 | 第19页 |
| 2.2 研究目的和意义 | 第19页 |
| 2.3 研究内容和方法 | 第19-20页 |
| 第三章 GAPDH基因在非生物胁迫下的表达分析 | 第20-28页 |
| 3.1 实验材料、试剂及设备 | 第20页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第20页 |
| 3.1.3 试剂的配制 | 第20页 |
| 3.2 实验步骤 | 第20-23页 |
| 3.2.1 实验材料培养与处理 | 第20-21页 |
| 3.2.2 不同处理材料总RNA的提取及第一链cDNA的合成 | 第21页 |
| 3.2.3 cDNA第一链的获得 | 第21页 |
| 3.2.4 目的基因和内参基因的引物专一性检测 | 第21-22页 |
| 3.2.5 利用实时定量PCR分析GAPDH基因在小麦中的表达 | 第22页 |
| 3.2.6 重复性实验与数据处理 | 第22-23页 |
| 3.3 实验结果 | 第23-26页 |
| 3.3.1 小麦幼芽总RNA提取 | 第23页 |
| 3.3.2 目的基因和内参基因的引物专一性检测 | 第23-24页 |
| 3.3.3 GAPDH与β-Actin基因的扩增曲线和溶解曲线分析 | 第24-25页 |
| 3.3.4 GAPDH基因的相对表达水平分析 | 第25-26页 |
| 3.4 讨论 | 第26-27页 |
| 3.5 结论 | 第27-28页 |
| 第四章 GAPDH基因启动子在3种非生物胁迫下的活性分析 | 第28-37页 |
| 4.1 实验材料、试剂及设备 | 第28-30页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 4.1.2 试剂与仪器 | 第28页 |
| 4.1.3 试剂的配制 | 第28-30页 |
| 4.2 实验步骤 | 第30-33页 |
| 4.2.1 菌种的活化以及质粒的提取 | 第30页 |
| 4.2.2 农杆菌(EHA105)感受态细胞的制备及检验 | 第30-31页 |
| 4.2.3 重组质粒转化农杆菌 | 第31页 |
| 4.2.4 农杆菌介导的烟草瞬时表达分析 | 第31-32页 |
| 4.2.5 组织化学染色 | 第32页 |
| 4.2.6 非生物胁迫 | 第32页 |
| 4.2.7 GUS荧光定量分析 | 第32-33页 |
| 4.3 实验结果 | 第33-35页 |
| 4.3.1 农杆菌菌落PCR | 第33页 |
| 4.3.2 GAPDH基因启动子活性分析 | 第33-34页 |
| 4.3.3 GAPDH基因启动子在不同非生物胁迫下的活性 | 第34-35页 |
| 4.4 讨论 | 第35-36页 |
| 4.5 结论 | 第36-37页 |
| 第五章 RNAi载体构建 | 第37-48页 |
| 5.1 实验材料、试剂及仪器 | 第37-38页 |
| 5.1.1 菌株以及载体 | 第37页 |
| 5.1.2 内切酶、试剂盒、引物合成及测序 | 第37页 |
| 5.1.3 试剂的配制 | 第37页 |
| 5.1.4 仪器以及设备 | 第37-38页 |
| 5.2 实验步骤 | 第38-43页 |
| 5.2.1 干扰序列的选择 | 第38-39页 |
| 5.2.2 菌种的活化以及质粒的提取 | 第39页 |
| 5.2.3 干扰序列的扩增 | 第39-40页 |
| 5.2.4 大肠杆菌BL21感受态制备与检验 | 第40-41页 |
| 5.2.5 正义干扰序列和质粒的酶切-连接及其转化 | 第41-42页 |
| 5.2.6 阳性菌落筛选及测序 | 第42页 |
| 5.2.7 反义干扰序列和质粒的酶切-连接及转化 | 第42-43页 |
| 5.3 实验结果 | 第43-46页 |
| 5.3.1 正义片段的连接 | 第43-44页 |
| 5.3.2 反义片段的连接 | 第44-46页 |
| 5.4 讨论 | 第46页 |
| 5.4.1 干扰片段的克隆 | 第46页 |
| 5.4.2 干扰载体的构建 | 第46页 |
| 5.4.3 进一步研究的设想 | 第46页 |
| 5.5 结论 | 第46-48页 |
| 第六章 RNAi干扰载体拟南芥转化 | 第48-53页 |
| 6.1 实验材料、试剂及仪器 | 第48页 |
| 6.1.1 菌株,载体及植物材料 | 第48页 |
| 6.1.2 酶及剂盒 | 第48页 |
| 6.1.3 仪器 | 第48页 |
| 6.2 实验步骤 | 第48-50页 |
| 6.2.1 菌种的活化以及质粒的提取 | 第48页 |
| 6.2.2 重组质粒转化农杆菌 | 第48-49页 |
| 6.2.3 花序浸泡法转化拟南芥 | 第49页 |
| 6.2.4 抗生素筛选及移栽 | 第49页 |
| 6.2.5 转基因植株的GUS检测 | 第49-50页 |
| 6.3 实验结果 | 第50-51页 |
| 6.3.1 根癌农杆菌的转化及鉴定 | 第50页 |
| 6.3.2 花序浸润法转化拟南芥及抗性筛选 | 第50-51页 |
| 6.3.3 转基因拟南芥的GUS染色 | 第51页 |
| 6.4 讨论 | 第51-52页 |
| 6.4.1 转基因植株的检测 | 第51-52页 |
| 6.4.2 进一步实验计划 | 第52页 |
| 6.5 结论 | 第52-53页 |
| 第七章 结论与展望 | 第53-55页 |
| 7.1 结论 | 第53页 |
| 7.2 创新点 | 第53页 |
| 7.3 展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
