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玉米紫色酸性磷酸酶基因的鉴定和表达特性分析
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玉米紫色酸性磷酸酶基因的鉴定和表达特性分析
论文目录
摘要
第1-6页
Abstract
第6-11页
1 文献综述
第11-23页
1.1 磷的生物功能
第11-12页
1.2 植物对磷的反应
第12页
1.3 土壤磷
第12-14页
1.4 植物耐低磷适应机制
第14-18页
1.4.1 根系形态结构上的变化
第14-15页
1.4.2 磷胁迫下植物生理生化上的变化
第15-16页
1.4.3 植物耐低磷的遗传机制
第16-18页
1.5 酸性磷酸酶研究
第18-23页
1.5.1 酸性磷酸酶活性研究
第18-19页
1.5.2 酸性磷酸酶基因研究
第19-20页
1.5.3 紫色酸性磷酸酶基因研究
第20-23页
2 目的与意义
第23-24页
3 材料与方法
第24-35页
3.1 材料及其处理
第24页
3.2 玉米中PAP基因的鉴定与分析
第24-25页
3.2.1 玉米中ZmPAP基因序列的预测
第24-25页
3.2.2 玉米ZmPAP基因的基因结构和系统发育分析
第25页
3.3 ZmPAPs半定量分析
第25-26页
3.3.1 模板的准备
第25页
3.3.2 各样品cDNA含量的均一化
第25-26页
3.3.3 基因半定量表达分析
第26页
3.4 ZmPAP基因克隆
第26-30页
3.4.1 总RNA提取
第26-27页
3.4.2 cDNA合成
第27页
3.4.3 反转录产物的电泳检测
第27页
3.4.4 开放阅读框的PCR扩增
第27-28页
3.4.5 目的片段的回收与纯化
第28-29页
3.4.6 目的片段与克隆载体的连接
第29页
3.4.7 CaCl_2法制备感受态细胞
第29页
3.4.8 热击法转化质粒DNA
第29-30页
3.4.9 阳性克隆的鉴定
第30页
3.4.10 基因序列分析
第30页
3.5 玉米紫色酸性磷酸酶基因在低磷胁迫下的表达分析
第30-32页
3.5.1 引物设计
第30页
3.5.2 引物的特异性检测
第30-31页
3.5.3 标准品的制备及标准曲线的优化
第31页
3.5.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)
第31-32页
3.6 基因枪法转化洋葱表皮细胞
第32-34页
3.6.1 金粉制备
第32页
3.6.2 DNA微子弹制备
第32-33页
3.6.3 受体材料准备
第33页
3.6.4 基因枪法导入目的基因
第33-34页
3.6.5 观察
第34页
3.7 酸性磷酸酶活性测定
第34-35页
3.7.1 主要试剂
第34页
3.7.2 实验器材
第34页
3.7.3 操作步骤
第34-35页
3.7.4 计算
第35页
4 结果与分析
第35-60页
4.1 玉米PAPs家族的鉴定和基因结构分析
第35-38页
4.2 玉米ZmPAPs基因家族的系统进化关系
第38-39页
4.3 玉米PAP蛋白保守域分析
第39-41页
4.4 ZmPAP在低磷处理下的表达差异
第41-43页
4.4.1 引物设计
第41页
4.4.2 摸索GAPDH基因的PCR扩增平台期
第41-42页
4.4.3 摸索GAPDH基因的模板浓度
第42页
4.4.4 ZmPAPs在玉米自交系178和9782中的表达分析
第42-43页
4.5 ZmPAPs基因全长CDS克隆与序列分析
第43-51页
4.5.1 基因克隆
第43-44页
4.5.2 基因分析
第44-51页
4.6 ZmPAPs表达特性分析
第51-56页
4.6.1 引物的特异性及扩增效率检测
第51-52页
4.6.2 ZmPAPs在不同处理时问下的表达
第52-56页
4.7 亚细胞定位
第56-57页
4.7.1 载体构建
第56页
4.7.2 洋葱表皮细胞亚细胞定位分析
第56-57页
4.8 玉米苗期酸性磷酸酶活性测定
第57-60页
4.8.1 根系酸性磷酸酶活性测定
第57-58页
4.8.2 低磷胁迫下178酸性磷酸酶活性变化
第58-59页
4.8.3 低磷胁迫下9782酸性磷酸酶活性变化
第59-60页
5 讨论
第60-63页
5.1 玉米PAP基因家族
第60-61页
5.2 基因的表达分析
第61页
5.3 ZmPAP26a可能的生物学功能
第61-62页
5.4 酸性磷酸酶活性
第62-63页
参考文献
第63-69页
致谢
第69-70页
附录
第70页
本篇论文共
70
页,
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。
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