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玉米紫色酸性磷酸酶基因的鉴定和表达特性分析

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玉米紫色酸性磷酸酶基因的鉴定和表达特性分析
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-11页
1 文献综述第11-23页
  1.1 磷的生物功能第11-12页
  1.2 植物对磷的反应第12页
  1.3 土壤磷第12-14页
  1.4 植物耐低磷适应机制第14-18页
    1.4.1 根系形态结构上的变化第14-15页
    1.4.2 磷胁迫下植物生理生化上的变化第15-16页
    1.4.3 植物耐低磷的遗传机制第16-18页
  1.5 酸性磷酸酶研究第18-23页
    1.5.1 酸性磷酸酶活性研究第18-19页
    1.5.2 酸性磷酸酶基因研究第19-20页
    1.5.3 紫色酸性磷酸酶基因研究第20-23页
2 目的与意义第23-24页
3 材料与方法第24-35页
  3.1 材料及其处理第24页
  3.2 玉米中PAP基因的鉴定与分析第24-25页
    3.2.1 玉米中ZmPAP基因序列的预测第24-25页
    3.2.2 玉米ZmPAP基因的基因结构和系统发育分析第25页
  3.3 ZmPAPs半定量分析第25-26页
    3.3.1 模板的准备第25页
    3.3.2 各样品cDNA含量的均一化第25-26页
    3.3.3 基因半定量表达分析第26页
  3.4 ZmPAP基因克隆第26-30页
    3.4.1 总RNA提取第26-27页
    3.4.2 cDNA合成第27页
    3.4.3 反转录产物的电泳检测第27页
    3.4.4 开放阅读框的PCR扩增第27-28页
    3.4.5 目的片段的回收与纯化第28-29页
    3.4.6 目的片段与克隆载体的连接第29页
    3.4.7 CaCl_2法制备感受态细胞第29页
    3.4.8 热击法转化质粒DNA第29-30页
    3.4.9 阳性克隆的鉴定第30页
    3.4.10 基因序列分析第30页
  3.5 玉米紫色酸性磷酸酶基因在低磷胁迫下的表达分析第30-32页
    3.5.1 引物设计第30页
    3.5.2 引物的特异性检测第30-31页
    3.5.3 标准品的制备及标准曲线的优化第31页
    3.5.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)第31-32页
  3.6 基因枪法转化洋葱表皮细胞第32-34页
    3.6.1 金粉制备第32页
    3.6.2 DNA微子弹制备第32-33页
    3.6.3 受体材料准备第33页
    3.6.4 基因枪法导入目的基因第33-34页
    3.6.5 观察第34页
  3.7 酸性磷酸酶活性测定第34-35页
    3.7.1 主要试剂第34页
    3.7.2 实验器材第34页
    3.7.3 操作步骤第34-35页
    3.7.4 计算第35页
4 结果与分析第35-60页
  4.1 玉米PAPs家族的鉴定和基因结构分析第35-38页
  4.2 玉米ZmPAPs基因家族的系统进化关系第38-39页
  4.3 玉米PAP蛋白保守域分析第39-41页
  4.4 ZmPAP在低磷处理下的表达差异第41-43页
    4.4.1 引物设计第41页
    4.4.2 摸索GAPDH基因的PCR扩增平台期第41-42页
    4.4.3 摸索GAPDH基因的模板浓度第42页
    4.4.4 ZmPAPs在玉米自交系178和9782中的表达分析第42-43页
  4.5 ZmPAPs基因全长CDS克隆与序列分析第43-51页
    4.5.1 基因克隆第43-44页
    4.5.2 基因分析第44-51页
  4.6 ZmPAPs表达特性分析第51-56页
    4.6.1 引物的特异性及扩增效率检测第51-52页
    4.6.2 ZmPAPs在不同处理时问下的表达第52-56页
  4.7 亚细胞定位第56-57页
    4.7.1 载体构建第56页
    4.7.2 洋葱表皮细胞亚细胞定位分析第56-57页
  4.8 玉米苗期酸性磷酸酶活性测定第57-60页
    4.8.1 根系酸性磷酸酶活性测定第57-58页
    4.8.2 低磷胁迫下178酸性磷酸酶活性变化第58-59页
    4.8.3 低磷胁迫下9782酸性磷酸酶活性变化第59-60页
5 讨论第60-63页
  5.1 玉米PAP基因家族第60-61页
  5.2 基因的表达分析第61页
  5.3 ZmPAP26a可能的生物学功能第61-62页
  5.4 酸性磷酸酶活性第62-63页
参考文献第63-69页
致谢第69-70页
附录第70页

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