论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 1 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 研究背景和意义 | 第11页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第11-18页 |
| 1.2.1 斑蝥素的性质、鉴定及其应用研究 | 第11-13页 |
| 1.2.2 斑蝥素在芫菁体内的含量、分布、存在形式 | 第13-14页 |
| 1.2.3 斑蝥素的提取、含量测定 | 第14-15页 |
| 1.2.4 芫菁的饲养 | 第15页 |
| 1.2.5 斑蝥素的化学合成 | 第15页 |
| 1.2.6 斑蝥素的生物合成及合成部位 | 第15-16页 |
| 1.2.7 法呢基焦磷酸合酶(FPPS)基因的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 研究目的、内容及技术路线 | 第18-20页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第18页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的创新性分析 | 第20-21页 |
| 2 眼斑芫菁FPPS基因全长的克隆及其序列分析 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂（盒）及配制 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第23-24页 |
| 2.2.2 McFPPS基因的克隆 | 第24-29页 |
| 2.2.3 cDNA序列的测通验证 | 第29-30页 |
| 2.2.4 McFPPS基因的生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.3 实验结果及分析 | 第30-39页 |
| 2.3.1 McFPPS基因的克隆 | 第30-32页 |
| 2.3.2 McFPPS基因序列的生物信息分析 | 第32-39页 |
| 3 眼斑芫菁FPPS基因表达谱分析 | 第39-49页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第39页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.2 实验试剂及配制 | 第39页 |
| 3.1.3 主要实验设备 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 定量引物的设计 | 第39-40页 |
| 3.2.2 实验取材 | 第40页 |
| 3.2.3 表达谱分析总RNA的提取及cDNA的制备 | 第40-42页 |
| 3.2.4 McFPPS基因的表达谱分析 | 第42-44页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第44-49页 |
| 3.3.1 定量引物扩增效率与特异性的检测 | 第44-45页 |
| 3.3.2 McFPPS/McSTE24 不同时期的表达谱分析 | 第45-46页 |
| 3.3.3 特异组织表达谱分析 | 第46-49页 |
| 4 眼斑芫菁FPPS基因的RNA干扰 | 第49-59页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第49页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第49页 |
| 4.1.2 实验试剂（盒）及配制 | 第49页 |
| 4.1.3 主要实验仪器设备 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-54页 |
| 4.2.1 干扰双链RNA（dsRNA）的合成 | 第49-52页 |
| 4.2.2 注射dsRNA | 第52页 |
| 4.2.3 McFPPS dsRNA干扰效率的检测 | 第52页 |
| 4.2.4 斑蝥素含量的检测 | 第52-53页 |
| 4.2.5 下游基因McMenA/McSTE24 表达量的检测 | 第53页 |
| 4.2.6 数据处理 | 第53-54页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第54-59页 |
| 4.3.1 干扰效率的检测 | 第54-55页 |
| 4.3.2 RNAi对斑蝥素含量的影响 | 第55-57页 |
| 4.3.3 RNAi对下游基因表达量的影响 | 第57-59页 |
| 5 眼斑芫菁FPPS基因的原核表达 | 第59-75页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第59-61页 |
| 5.1.1 实验菌株 | 第59页 |
| 5.1.2 实验试剂（盒）及配制 | 第59-61页 |
| 5.1.3 主要实验仪器设备 | 第61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-68页 |
| 5.2.1McFPPS基因表达特异引物的设计 | 第61-62页 |
| 5.2.2 McFPPS基因表达目的片段的PCR扩增 | 第62-63页 |
| 5.2.3 McFPPS基因重组克隆质粒的构建 | 第63页 |
| 5.2.4 McFPPS基因重组表达质粒的构建 | 第63-65页 |
| 5.2.5 重组表达质粒的诱导表达 | 第65-66页 |
| 5.2.6 目的蛋白原核表达形式的确定 | 第66-68页 |
| 5.2.7 原核表达条件的优化 | 第68页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第68-75页 |
| 5.3.1 重组表达质粒的构建 | 第68-69页 |
| 5.3.2 目的蛋白原核表达形式的确定 | 第69-70页 |
| 5.3.3 原核表达条件的优化 | 第70-75页 |
| 6 讨论 | 第75-79页 |
| 7 主要结论和展望 | 第79-81页 |
| 7.1 主要结论 | 第79页 |
| 7.2 展望 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 附录 | 第89页 |
