论文目录 | |
致谢 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-13页 |
1. 绪论 | 第13-23页 |
1.1 蔗糖磷酸化酶的概述 | 第13-15页 |
1.2 酶的固定化研究进展 | 第15-20页 |
1.2.1 酶的固定化方法 | 第15-16页 |
1.2.2 载体结合法 | 第16页 |
1.2.3 包埋法 | 第16-17页 |
1.2.4 膜截留法 | 第17页 |
1.2.5 无载体交联 | 第17-20页 |
1.3 壳聚糖在酶固定化中的应用 | 第20-22页 |
1.4 本文的研究内容及意义 | 第22-23页 |
2. 蔗糖磷酸化酶的克隆表达 | 第23-48页 |
2.1 引言 | 第23页 |
2.2 材料与设备 | 第23-25页 |
2.2.1 菌株与质粒 | 第23页 |
2.2.2 培养基 | 第23-24页 |
2.2.3 主要实验试剂 | 第24页 |
2.2.4 主要实验仪器 | 第24-25页 |
2.3 实验方法 | 第25-36页 |
2.3.1 长双歧杆菌的穿刺培养 | 第25页 |
2.3.2 引物的设计 | 第25-26页 |
2.3.3 PCR获得目的基因 | 第26-27页 |
2.3.4 重组质粒pMD19-BLSpase的构建 | 第27-29页 |
2.3.5 重组质粒pET21a-BLSpase的构建 | 第29-31页 |
2.3.6 基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET21a-BLSpase的构建 | 第31-32页 |
2.3.7 重组蔗糖磷酸化酶的异源表达和分离纯化 | 第32-33页 |
2.3.8 重组蔗糖磷酸化酶的酶学性质表征 | 第33-36页 |
2.4 实验结果与讨论 | 第36-46页 |
2.4.1 长双歧杆菌Spase基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
2.4.2 PCR产物的克隆 | 第37-38页 |
2.4.3 BLSpase基因测序分析 | 第38-40页 |
2.4.4 基因工程菌的构建 | 第40-42页 |
2.4.5 重组蔗糖磷酸化酶的异源表达和分离纯化 | 第42-43页 |
2.4.6 重组蔗糖磷酸化酶的酶学性质表征 | 第43-46页 |
2.5 结论 | 第46-48页 |
3. 戊二醛交联制备Spase交联聚集体 | 第48-59页 |
3.1 引言 | 第48页 |
3.2 材料与方法 | 第48-50页 |
3.2.1 主要实验试剂与仪器 | 第48页 |
3.2.2 BSA与BLSpase共交联聚集体的制备 | 第48-49页 |
3.2.3 BSA与BLSpase共交联聚集体的分析方法 | 第49页 |
3.2.4 BSA与BLSpase共交联聚集体酶学性质研究 | 第49-50页 |
3.3 结果与讨论 | 第50-57页 |
3.3.1 戊二醛交联制备Spase交联聚集体条件的优化 | 第50-54页 |
3.3.2 BSA-BLSpase-CLEAs的酶学性质 | 第54-57页 |
3.4 结论 | 第57-59页 |
4. 壳聚糖固定化Spase的研究 | 第59-70页 |
4.1 引言 | 第59页 |
4.2 材料与方法 | 第59-61页 |
4.2.1 主要实验试剂与仪器 | 第59-60页 |
4.2.2 壳聚糖微球的制备 | 第60页 |
4.2.3 交联剂活化壳聚糖载体 | 第60页 |
4.2.4 蔗糖磷酸化酶在活化壳聚糖微球载体上的固定化 | 第60页 |
4.2.5 固定化酶的分析方法 | 第60-61页 |
4.2.6 固定化酶基本性质的测定 | 第61页 |
4.3 结果与讨论 | 第61-69页 |
4.3.1 壳聚糖浓度对微球制备的影响 | 第62页 |
4.3.2 交联剂制备活化载体条件优化 | 第62-63页 |
4.3.3 BLSpase的固定化过程 | 第63-65页 |
4.3.4 固定化酶的酶学性质 | 第65-69页 |
4.4 结论 | 第69-70页 |
5. 结论与展望 | 第70-73页 |
5.1 结论 | 第70-71页 |
5.2 创新 | 第71页 |
5.3 展望 | 第71-73页 |
参考文献 | 第73-80页 |
附录 作者简介 | 第80页 |