论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 细胞凋亡概念 | 第11页 |
| 1.2 细胞凋亡特征 | 第11-12页 |
| 1.2.1 形态学变化 | 第11页 |
| 1.2.2 生物化学变化 | 第11-12页 |
| 1.3 昆虫杆状病毒侵染与昆虫抗病毒防御 | 第12-13页 |
| 1.3.1 杆状病毒特点与侵染过程 | 第12页 |
| 1.3.2 昆虫抗病毒防御 | 第12-13页 |
| 1.4 杆状病毒细胞凋亡抑制蛋白 | 第13-14页 |
| 1.5 柞蚕核型多角体病毒细胞凋亡蛋白抑制因子 | 第14-19页 |
| 1.5.1 柞蚕 | 第14-15页 |
| 1.5.2 柞蚕核型多角体病毒 | 第15页 |
| 1.5.3 柞蚕核型多角体病毒基因组 | 第15-17页 |
| 1.5.4 柞蚕核型多角体病毒细胞凋亡蛋白抑制因子 | 第17-19页 |
| 1.6 本研究的目的 | 第19-20页 |
| 2 ApMNPV细胞凋亡蛋白抑制因子Ap-iap1和iap2基因分析 | 第20-38页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料、试剂与仪器 | 第20-22页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.3.1 细胞培养及病毒感染 | 第22页 |
| 2.3.2 细胞转染 | 第22页 |
| 2.3.3 ApMNPV△ph/egfp~+病毒感染Tn-Hi5细胞的总RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.3.4 qRT-PCR检测 | 第23-24页 |
| 2.3.5 Ap-iap1和iap2基因的5'RACE | 第24-28页 |
| 2.3.6 Ap-iap1和iap2基因的3'RACE | 第28-29页 |
| 2.3.7 目的片段克隆及测序 | 第29-32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-36页 |
| 2.4.1 ApMNPV对Tn-Hi5细胞的感染性 | 第32-33页 |
| 2.4.2 Ap-iap1和iap2基因5'端和3'端非编码区扩增及克隆 | 第33-34页 |
| 2.4.3 Ap-iap1和iap2基因5'端和3'端非编码区序列分析 | 第34-36页 |
| 2.4.4 qRT-PCR分析Ap-iaps基因转录表达 | 第36页 |
| 2.5 讨论 | 第36-37页 |
| 2.6 小结 | 第37-38页 |
| 3 Ap-iap1和iap2基因原核表达载体的构建及表达研究 | 第38-52页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料、试剂与仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第38页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-44页 |
| 3.3.1 Ap-iap1和iap2基因序列的克隆 | 第39-41页 |
| 3.3.2 原核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.3.3 目的基因的表达 | 第42-43页 |
| 3.3.4 蛋白SDS-PAGE鉴定 | 第43-44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-50页 |
| 3.4.1 Ap-iap1和iap2基因片段原核表达载体构建 | 第44-45页 |
| 3.4.2 Ap-iap1和iap2基因片段的克隆 | 第45-47页 |
| 3.4.3 原核表达载体重组质粒的双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4.4 Ap-IAP1和IAP2在大肠杆菌中的表达分析 | 第48-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-51页 |
| 3.6 小结 | 第51-52页 |
| 4 Ap-IAP1和IAP2蛋白的抗体制备及性质分析 | 第52-61页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 实验材料、试剂与仪器 | 第52-54页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第52-54页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-58页 |
| 4.3.1 融合蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.2 Western Blot鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3.3 Bradford法测定蛋白含量 | 第56页 |
| 4.3.4 多克隆抗体的制备 | 第56-57页 |
| 4.3.5 E3泛素连接酶活性分析 | 第57页 |
| 4.3.6 蛋白质体外相互作用检测 | 第57-58页 |
| 4.4 结果与分析 | 第58-60页 |
| 4.4.1 Western Blot检测 | 第58-59页 |
| 4.4.2 E3泛素连接酶活性体外检测 | 第59页 |
| 4.4.3 相互作用蛋白质体外检测 | 第59-60页 |
| 4.5 讨论 | 第60页 |
| 4.6 小结 | 第60-61页 |
| 5 ApMNPV细胞凋亡蛋白抑制因子Ap-iap1和iap2抗细胞凋亡作用分析 | 第61-70页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验材料、试剂与仪器 | 第61-62页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第61页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第61页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第61-62页 |
| 5.3 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.3.1 Tn-Hi5细胞类caspase-3蛋白酶活性分析 | 第62页 |
| 5.3.2 链RNA合成 | 第62-63页 |
| 5.3.3 RNAi | 第63-64页 |
| 5.4 结果与分析 | 第64-67页 |
| 5.4.1 ApMNPV对抗Tn-Hi5细胞凋亡的作用 | 第64-65页 |
| 5.4.2 qRT-PCR分析RNAi对Ap-iaps及DNA pol基因转录表达的影响 | 第65-66页 |
| 5.4.3 Ap-iaps基因干扰对ApMNPV抑制细胞凋亡的影响 | 第66-67页 |
| 5.5 讨论 | 第67-68页 |
| 5.6 小结 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 附录A 缩写与符号 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
