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Lactobacillus plantarum醇脱氢酶的克隆,表达及酶学性质研究

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Lactobacillus plantarum醇脱氢酶的克隆,表达及酶学性质研究
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-11页
第一章引言第11-16页
  1.1 醇脱氢酶概况第11-13页
    1.1.1 醇脱氢酶的应用第11页
    1.1.2 醇脱氢酶种类,结构及反应机理第11-13页
      1.1.2.1 醇脱氢酶的种类第11-12页
      1.1.2.2 醇脱氢酶结构及反应机理第12-13页
  1.2 乳酸菌中的醇脱氢酶第13-14页
  1.3 本课题的研究意义第14-15页
  1.4 论文研究内容第15-16页
第二章 Lactobacillus plantarum醇脱氢酶的克隆第16-32页
  2.1 实验材料第16-19页
    2.1.1 菌株和载体第16页
    2.1.2 引物第16-18页
    2.1.3 主要溶液配制第18页
    2.1.4 主要试剂第18页
    2.1.5 主要设备第18-19页
  2.2 实验方法第19-25页
    2.2.1 Lactobacillus plantarum醇脱氢酶中间序列的扩增第19-23页
      2.2.1.1 Lactobacillus plantarum基因组DNA的提取第19页
      2.2.1.2 设计兼并引物,PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析第19-21页
      2.2.1.3 TA克隆、转化、菌落PCR及测序第21-23页
    2.2.2 hi TAIL-PCR 的方法扩增已知序列旁侧的序列第23-25页
  2.3 实验结果第25-31页
    2.3.1 兼并引物扩增后结果第25-27页
    2.3.2 hiTAIL-PCR扩增 5’端和 3’端的未知序列第27-31页
  2.4 讨论第31-32页
第三章 Lactobacillus plantarum醇脱氢酶的重组表达及酶学性质研究第32-52页
  3.1 实验材料第32-34页
    3.1.1 菌株第32页
    3.1.2 引物第32页
    3.1.3 主要溶液配置第32-33页
    3.1.4 主要试剂第33-34页
    3.1.5 主要仪器第34页
  3.2 实验方法第34-40页
    3.2.1 PCR扩增第34-35页
    3.2.2 PCR产物与表达载体的连接第35-36页
    3.2.3 制备感受态细胞第36-37页
    3.2.4 转化第37页
    3.2.5 菌落PCR鉴定与测序第37页
    3.2.6 重组质粒诱导表达第37-38页
    3.2.7 Bradford法测蛋白浓度第38页
    3.2.8 蛋白质纯化第38-39页
    3.2.9 醇脱氢酶活性测定第39-40页
    3.2.10 气相分析第40页
  3.3 实验结果第40-49页
    3.3.1 Lactobacillus plantarum醇脱氢酶与表达载体的连接第40-41页
      3.3.1.1 五种醇脱氢酶基因序列的扩增第40页
      3.3.1.2 将目的片段与表达载体连接第40-41页
    3.3.2 五种醇脱氢酶重组质粒的诱导表达及表达条件优化第41-46页
      3.3.2.1 质粒提取第41-42页
      3.3.2.2 质粒转化和表达条件优化第42-45页
      3.3.2.3 三种醇脱氢酶的纯化第45-46页
    3.3.3 酶活测定结果第46-49页
      3.3.3.1 酶活方法的确定第47页
      3.3.3.2 1a,2a,3s的底物特异性第47-49页
  3.4 讨论第49-52页
    3.4.1 重组质粒的构建和原核表达第49-50页
    3.4.2 1a,2a,3s三种醇脱氢酶的纯化第50-51页
    3.4.3 酶活性测试第51-52页
致谢第52-53页
参考文献第53-58页
攻读学位期间发表的论文第58-59页

本篇论文共59页,点击这进入下载页面
 
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