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基于TAP技术对拟南芥CPK10互作蛋白的筛选

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基于TAP技术对拟南芥CPK10互作蛋白的筛选
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-10页
1 前言第10-12页
2 试验材料第12-14页
  2.1 植物材料、试验菌种及质粒第12页
  2.2 试验仪器第12页
  2.3 主要试剂第12-13页
  2.4 主要溶液配制第13页
  2.5 主要培养基第13-14页
3 试验方法第14-24页
  3.1 植物材料培养第14页
  3.2 pCM1307-3FLAG-3HA-CPK10 植物表达载体的构建第14-16页
    3.2.1 引物的设计第14页
    3.2.2 目的基因的扩增第14-15页
    3.2.3 目的基因连接pMD18-T vector及蓝白斑筛选第15页
    3.2.4 目的基因连接pCM1307-3FLAG-3HA载体及酶切验证第15-16页
  3.3 原生质体转化及蛋白瞬时表达第16页
  3.4 原生质体中蛋白提取及TAP技术亲和蛋白第16-17页
  3.5 亲和蛋白的浓缩第17页
  3.6 蛋白胶的银染及生物质谱分析第17页
  3.7 Ca Cl2法制备大肠杆菌DH5α 感受态细胞第17页
  3.8 质粒提取第17-18页
  3.9 农杆菌感受态细胞的制备和转化第18页
  3.10 花序浸染法农杆菌转化拟南芥植株第18-19页
  3.11 拟南芥转基因阳性植株的筛选第19页
  3.12 植物中可溶性总蛋白的提取及TAP技术第19-20页
  3.13 Western-blotting检测蛋白表达第20页
  3.14 植物总RNA的提取第20-21页
  3.15 基因半定量RT-PCR第21-24页
    3.15.1 引物的设计第21页
    3.15.2 反转录反应第21-22页
    3.15.3 内参基因的扩增第22页
    3.15.4 PCR扩增目的基因第22-24页
4 结果与分析第24-34页
  4.1 pCM1307-3FLAG-3HA-CPK10 植物表达载体的构建第24-25页
    4.1.1 目的基因的扩增及测序结果分析第24页
    4.1.2 TAP用双元载体的构建及重组子鉴定第24-25页
  4.2 Western-blotting分析原生质体转化后的瞬时蛋白表达第25-27页
  4.3 转基因阳性植株的筛选及Western-blotting鉴定第27-28页
  4.4 TAP技术筛选蛋白复合体浓缩后Western-blotting检测第28页
  4.5 浓缩后蛋白银染结果第28-29页
  4.6 TAP技术结合质谱检查分析互作蛋白第29-30页
  4.7 互作蛋白信息分析第30-32页
  4.8 RT-PCR分析第32-34页
5 讨论与展望第34-36页
  5.1 关于TAP技术的研究第34页
  5.2 TAP标签的选择第34-35页
  5.3 筛选AtCPK10 互作蛋白的意义第35-36页
6 结论第36-37页
参考文献第37-40页
在读期间发表的学术论文第40-41页
作者简介第41-42页
致谢第42-43页

本篇论文共43页,点击这进入下载页面
 
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