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紫云英AD-cDNA文库的构建及与豆血红蛋白Lb相互作用靶蛋白的筛选

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紫云英AD-cDNA文库的构建及与豆血红蛋白Lb相互作用靶蛋白的筛选
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略语表第10-11页
1 前言第11-27页
  1.1 生物固氮概况第11页
  1.2 根瘤菌—豆科植物共生体系的作用机理及研究进展第11-14页
  1.3 根瘤菌中与结瘤固氮相关的基因第14-17页
    1.3.1 nif基因第14-15页
    1.3.2 fix基因第15页
    1.3.3 其它基因及基因间的相互作用第15-17页
  1.4 豆科植物中与结瘤固氮相关的基因第17-21页
    1.4.1 参与结瘤因子信号传导途径的基因第17-19页
    1.4.2 其它结瘤素基因第19-21页
  1.5 酵母双杂交系统第21-23页
    1.5.1 酵母双杂交的原理第21-22页
    1.5.2 酵母双杂交的特点第22-23页
  1.6 紫云英—华癸中慢生根瘤菌共生固氮体系研究进展第23-25页
  1.7 研究目的和意义第25-27页
2 材料与方法第27-38页
  2.1 实验材料第27-30页
    2.1.1 所用菌株和质粒第27-28页
    2.1.2 培养基第28-29页
    2.1.3 常用缓冲液及其它第29-30页
    2.1.4 抗生素第30页
  2.2 方法第30-38页
    2.2.1 紫云英盆栽第31页
    2.2.2 紫云英总RNA的抽提第31-32页
    2.2.3 AD-cDNA文库的构建第32-36页
      2.2.3.1 RT-PCR合成cDNA第一链第32-33页
      2.2.3.2 LD-PCR合成cDNA第二链第33页
      2.2.3.3 双链cDNA的纯化第33-34页
      2.2.3.4 酵母感受态的制备第34页
      2.2.3.5 将ds cDNA和pGADT7-Rec转化AH109感受态细胞第34-35页
      2.2.3.6 在SD/-Leu平板上筛选库转化子第35页
      2.2.3.7 收集库转化子第35页
      2.2.3.8 cDNA文库的检测第35-36页
    2.2.4 诱饵质粒的构建及检测第36-37页
      2.2.4.1 目标基因的克隆及载体构建第36页
      2.2.4.2 诱饵载体自激活活性及毒性的检测第36-37页
      2.2.4.3 滤纸平板影印第37页
    2.2.5 紫云英AD-cDNA文库的筛选第37-38页
    2.2.6 阳性克隆的分析第38页
      2.2.6.1 菌落PCR检测阳性克隆插入片段大小第38页
      2.2.6.2 阳性克隆酵母质粒的抽提第38页
3 结果与分析第38-46页
  3.1 紫云英总RNA和cDNA的质量第38-40页
  3.2 紫云英AD-cDNA文库库容量的鉴定第40-42页
  3.3 诱饵载体pGBKT7-AsB2510的构建第42-43页
  3.4 与Lb相互作用的阳性克隆筛选及鉴定第43-44页
  3.5 阳性克隆的验证和分析第44-46页
4 总结与讨论第46-52页
  4.1 总结第46-47页
  4.2 讨论第47-50页
    4.2.1 cDNA文库质量的影响因素第47-48页
    4.2.2 诱饵基因的选择第48-49页
    4.2.3 关于Lb和靶蛋白互作的可能机制及其在共生固氮中的功能第49-50页
  4.3 进一步研究设想第50-52页
参考文献第52-62页
致谢第62-63页
论文发表情况第63-64页
附录第64页

本篇论文共64页,点击这进入下载页面
 
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