论文目录 | |
摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
目录 | 第6-9页 |
第一章 引言 | 第9-14页 |
1.1 γ-氨基丁酸简介 | 第9-10页 |
1.1.1 γ-氨基丁酸的理化性质 | 第9页 |
1.1.2 γ-氨基丁酸的生理功能 | 第9-10页 |
1.2 γ-氨基丁酸的生产 | 第10-12页 |
1.2.1 化学合成法 | 第10-11页 |
1.2.2 植物提取法 | 第11页 |
1.2.3 微生物发酵法 | 第11-12页 |
1.3 谷氨酸脱羧酶的研究进展 | 第12-13页 |
1.3.1 动物组织GAD | 第12页 |
1.3.2 植物GAD | 第12页 |
1.3.3 微生物GAD | 第12-13页 |
1.3.4 GAD的异源表达研究 | 第13页 |
1.4 本论文主要研究内容 | 第13-14页 |
第二章 Lactobacillus plantarum ZJ3443谷氨酸脱羧酶在大肠杆菌中的克隆表达 | 第14-25页 |
2.1 引言 | 第14页 |
2.2 材料试剂与设备 | 第14-15页 |
2.2.1 材料与试剂 | 第14-15页 |
2.2.2 设备 | 第15页 |
2.3 实验方法 | 第15-18页 |
2.3.1 DNA操作 | 第15-17页 |
2.3.2 GAD基因的PCR扩增 | 第17页 |
2.3.3 表达载体pET-22b/gad的构建 | 第17页 |
2.3.4 重组GAD的生产 | 第17-18页 |
2.3.5 分析方法 | 第18页 |
2.4 结果与分析 | 第18-24页 |
2.4.1 L.plantarum ZJ3443谷氨酸脱羧酶基因的克隆 | 第18-19页 |
2.4.2 lapgad的生物信息学分析 | 第19-21页 |
2.4.3 重组质粒pET-22b/lapgad的构建 | 第21页 |
2.4.4 重组GAD在大肠杆菌中的表达 | 第21-23页 |
2.4.5 重组菌E coli BL21(DE3)(pET-22b/gad)催化谷氨酸合成γ-氨基丁酸 | 第23-24页 |
2.5 本章小结 | 第24-25页 |
第三章 重组大肠杆菌发酵GAD的条件优化 | 第25-30页 |
3.1 前言 | 第25页 |
3.2 材料试剂与设备 | 第25页 |
3.2.1 材料与试剂 | 第25页 |
3.2.2 设备 | 第25页 |
3.3 实验方法 | 第25页 |
3.4 结果与分析 | 第25-29页 |
3.4.1 不同诱导温度对重组菌E.coli BL21(DE3)(pET-22b/gad)胞内GAD酶活的影响 | 第25-26页 |
3.4.2 不同诱导剂浓度对重组菌E.coli BL21(DE3)(pET-22b/gad)胞内GAD酶活的影响 | 第26-27页 |
3.4.4 不同培养基对重组菌E. coli BL21(DE3)(pET-22b/gad)胞内GAD酶活的影响 | 第27-28页 |
3.4.5 不同诱导起始菌体浓度对重组菌E. coli BL21(DE3)(pET-22b/gad)胞内GAD酶活的影响 | 第28页 |
3.4.6 优化后重组菌E.coli BL21(DE3)(pET-22b/gad)对谷氨酸的催化效率 | 第28-29页 |
3.5 本章小结 | 第29-30页 |
第四章 重组GAD的纯化及酶学性质研究 | 第30-36页 |
4.1 前言 | 第30页 |
4.2 材料试剂与设备 | 第30页 |
4.2.1 材料与试剂 | 第30页 |
4.2.2 设备 | 第30页 |
4.3 实验方法 | 第30-32页 |
4.3.1 重组GAD的诱导表达 | 第30-31页 |
4.3.2 重组GAD的纯化 | 第31页 |
4.3.3 GAD的酶学性质分析 | 第31-32页 |
4.3.4 分析方法 | 第32页 |
4.4 结果与分析 | 第32-35页 |
4.4.1 重组GAD的纯化 | 第32-33页 |
4.4.2 重组GAD的酶学性质 | 第33-35页 |
4.5 本章小结 | 第35-36页 |
第五章 L.plantarum ZJ3443 GAD在枯草芽孢杆菌中的表达及转化条件优化 | 第36-44页 |
5.1 前言 | 第36页 |
5.2 材料试剂与设备 | 第36页 |
5.2.1 材料与试剂 | 第36页 |
5.2.2 设备 | 第36页 |
5.3 实验方法 | 第36-37页 |
5.3.1 表达载体pMA5/gad的构建 | 第36-37页 |
5.3.2 GAD在枯草芽孢杆菌的表达 | 第37页 |
5.3.3 分析方法 | 第37页 |
5.4 结果与分析 | 第37-43页 |
5.4.1 重组质粒pMA5/lapgad的构建 | 第37-38页 |
5.4.2 gad在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第38-39页 |
5.4.3 培养条件优化提高重组菌B.subtilis WB600(pMA5/gad)细胞得率及胞内GAD酶活 | 第39-41页 |
5.4.5 不同转化条件对重组菌B.subtilis WB600(pMA5/lapgad)转化谷氨酸合成γ-氨基丁酸的影响 | 第41-42页 |
5.4.6 优化后重组菌B.subtilis WB600(pMA5/lapgad)对谷氨酸的催化效率 | 第42-43页 |
5.5 结论 | 第43-44页 |
第六章 结论与展望 | 第44-45页 |
6.1 主要结论 | 第44页 |
6.2 存在的问题及展望 | 第44-45页 |
参考文献 | 第45-49页 |
致谢 | 第49页 |