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重组酵母工程菌合成谷胱甘肽的研究

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重组酵母工程菌合成谷胱甘肽的研究
论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
第1章 绪论第11-24页
  1.1 概述第11-13页
    1.1.1 谷胱甘肽的结构,分布与性质第11-12页
    1.1.2 谷胱甘肽生物学功能第12页
    1.1.3 谷胱甘肽的应用现状第12-13页
  1.2 谷胱甘肽的生产第13-20页
    1.2.1 萃取法第13页
    1.2.2 化学合成法第13-14页
    1.2.3 微生物发酵法第14-18页
    1.2.4 酶法第18-20页
  1.3 酵母的选择标记第20-21页
  1.4 GSH含量的测定第21-22页
    1.4.1 分光光度法第21页
    1.4.2 荧光法第21页
    1.4.3 高效液相色谱法(HPLC)第21-22页
  1.5 课题来源与研究意义第22页
    1.5.1 课题来源第22页
    1.5.2 研究意义第22页
  1.6 本课题研究内容第22-24页
第2章 酿酒酵母工程菌的构建第24-44页
  2.1 材料与方法第24-34页
    2.1.1 材料第24-27页
    2.1.2 实验方法第27-34页
  2.2 结果与讨论第34-43页
    2.2.1 遗传霉素G418,潮霉素Hyg最低杀伤浓度第34-35页
    2.2.2 GSH1、GSH2、Kan~r、Hyg~r基因的克隆第35-36页
    2.2.3 酵母菌重组表达质粒的构建第36-39页
    2.2.4 菌落PCR鉴定第39页
    2.2.5 重组质粒的酶切验证第39-40页
    2.2.6 酵母转化子的筛选第40-41页
    2.2.7 重组菌的蛋白表达第41-42页
    2.2.8 重组菌的遗传稳定性第42-43页
  2.3 本章小结第43-44页
第3章 重组菌的表达及发酵条件的初步研究第44-58页
  3.1 材料与方法第44-47页
    3.1.1 材料第44-46页
    3.1.2 试验方法第46-47页
  3.2 结果与讨论第47-57页
    3.2.1 重组菌株的生物量第47-48页
    3.2.2 重组菌株合成谷胱甘肽的测定第48-49页
    3.2.3 重组菌S.TS013/GSH1+GSH2发酵条件的优化第49-52页
    3.2.4 重组菌S.TS013/GSH1+GSH2发酵培养基的优化第52-56页
    3.2.5 正交实验优化培养基第56-57页
  3.3 本章小结第57-58页
第4章 氨基酸和过氧化氢的添加对谷胱甘肽发酵的影响第58-67页
  4.1 材料与方法第58-60页
    4.1.1 材料第58-59页
    4.1.2 试验方法第59-60页
  4.2 结果与讨论第60-66页
    4.2.1 不同培养时间菌体的OD值和菌体干重第60-61页
    4.2.2 OD_(600)值与菌体干重的函数关系的测定第61-62页
    4.2.3 氨基酸的添加和H2O2氧应力胁迫的影响第62-66页
  4.3 本章小结第66-67页
第5章 重组酵母菌酶法催化合成谷胱甘肽的研究第67-74页
  5.1 材料与方法第67-69页
    5.1.1 材料第67-68页
    5.1.2 实验方法第68-69页
  5.2 结果与讨论第69-73页
    5.2.1 酵母细胞对GSH的通透性第69-70页
    5.2.2 酶反应体系的组成第70页
    5.2.3 不同菌株GSH合成能力的比较第70-71页
    5.2.4 两个重组菌一步合成GSH第71-72页
    5.2.5 两个重组菌两步合成GSH第72-73页
  5.3 本章小结第73-74页
第6章 结论与展望第74-76页
  6.1 结论第74-75页
  6.2 进一步工作方向第75-76页
致谢第76-77页
参考文献第77-83页
攻读学位期间的研究成果第83页

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