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HP-PRRSV囊膜糖蛋白5糖基化位点突变及功能初探

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HP-PRRSV囊膜糖蛋白5糖基化位点突变及功能初探
论文目录
 
符号说明第1-9页
中文摘要第9-11页
Abstract第11-13页
1 前言第13-26页
  1.1 猪繁殖与呼吸综合征的概述第13-14页
  1.2 PRRS流行病学第14页
  1.3 PRRSV的分类地位及生物学特性第14-16页
    1.3.1 分类地位及形态特征第14-15页
    1.3.2 生物学特性第15-16页
  1.4 分子生物学特点第16-21页
    1.4.1 PRRSV的基因组结构第16-17页
    1.4.2 非结构蛋白第17-18页
    1.4.3 PRRSV结构蛋白第18-20页
    1.4.4 PRRSV的遗传变异第20-21页
  1.5 PRRSV免疫反应第21-23页
    1.5.1 PRRSV体液免疫第21-22页
    1.5.2 PRRSV细胞免疫第22-23页
  1.6 PRRSV致病机制第23页
  1.7 症状第23-25页
    1.7.1 临床症状第23-24页
    1.7.2 剖检病变第24页
    1.7.3 显微病变第24-25页
  1.8 本研究的目的及意义第25-26页
2 材料与方法第26-45页
  2.1 材料第26-29页
    2.1.1 病毒毒株及血清第26页
    2.1.2 病毒质粒第26-27页
    2.1.3 工程菌第27页
    2.1.4 细胞器第27页
    2.1.5 蛋白试剂及工具酶第27页
    2.1.6 试验所用溶液及其配制第27-29页
  2.2 方法第29-45页
    2.2.1 pVAX1-N30A引物设计与PCR扩增第29页
    2.2.2 RT-PCR扩增ORF5基因第29-30页
    2.2.3 获得编码PRRSV GP5表位A突变的基因片段第30-31页
    2.2.4 纯化回收PCR产物第31-32页
    2.2.5 制备DH5α 感受态细胞第32-33页
    2.2.6 ORF5基因的TA克隆与转化第33-34页
    2.2.7 提取重组质粒第34页
    2.2.8 重组质粒鉴定第34-35页
    2.2.9 定点突变原理第35页
    2.2.10 pVAX1-N34A引物序列第35-36页
    2.2.11 pVAX1-N35A引物序列第36页
    2.2.12 pVAX1-N44A引物序列第36页
    2.2.13 pVAX1-N51A引物序列第36页
    2.2.14 定点突变方法第36-37页
    2.2.15 293T细胞培养第37-38页
    2.2.16 转染细胞第38页
    2.2.17 PRRSV RNA提取第38-39页
    2.2.18 反转录第39-40页
    2.2.19 荧光定量PCR检测第40-44页
    2.2.20 细胞流式技术第44-45页
3 结果与分析第45-55页
  3.1 基因克隆鉴定与分析第45-46页
    3.1.1 RT-PCR扩增ORF5基因第45-46页
    3.1.2 重组质粒p MD18-T-ORF5的鉴定与分析第46页
  3.2 糖基化位点突变的鉴定第46-49页
    3.2.1 Over-lap PCR第46-48页
    3.2.2 突变体重组质粒鉴定第48页
    3.2.3 标准品质粒电泳图第48-49页
  3.3 ORF5转录后m RNA动态变化第49-50页
    3.3.1 实时定量PCR熔解曲线第49页
    3.3.2 实时定量PCR标准曲线第49-50页
  3.4 转染PRRSV ORF5突变体细胞凋亡状况第50-55页
4 讨论第55-57页
5 结论第57-58页
参考文献第58-67页
致谢第67-68页
研究生期间发表论文第68页

本篇论文共68页,点击这进入下载页面
 
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