论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 黄萎病的危害及其防治 | 第13-16页 |
| 1.1.1 棉花黄萎病及其危害 | 第13-14页 |
| 1.1.2 黄萎病菌的致病机制 | 第14-15页 |
| 1.1.3 黄萎病菌的遗传抗性 | 第15-16页 |
| 1.2 棉花黄萎病抗性的生理生化机制 | 第16-18页 |
| 1.2.1 组织抗性 | 第16页 |
| 1.2.2 生理生化抗性 | 第16-17页 |
| 1.2.3 生物互作 | 第17-18页 |
| 1.3 介导黄萎病抗性的相关基因 | 第18-20页 |
| 1.3.1 植物R基因与植物免疫 | 第18页 |
| 1.3.2 Ve基因介导的抗性 | 第18-19页 |
| 1.3.3 介导信号转导的抗性基因 | 第19-20页 |
| 1.3.4 植物结构相关的防御类基因 | 第20页 |
| 1.4 黄酮类物质在植物中的防御作用 | 第20-22页 |
| 1.5 立题依据 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| 2.1 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24页 |
| 2.2.1 供试植物材料 | 第24页 |
| 2.2.2 供试棉花黄萎病菌 | 第24页 |
| 2.2.3 质粒载体与菌株 | 第24页 |
| 2.3 实验试剂 | 第24页 |
| 2.4 引物合成及DNA测序 | 第24-25页 |
| 2.5 常用培养基及溶液的配置 | 第25-27页 |
| 2.5.1 培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.5.2 常用溶液的配制 | 第26-27页 |
| 2.5.3 抗生素的配制 | 第27页 |
| 2.6 实验方法 | 第27-39页 |
| 2.6.1 拟南芥的种植 | 第27-28页 |
| 2.6.2 拟南芥叶片花青素的提取和干燥 | 第28页 |
| 2.6.3 黄萎病菌的活化与培养 | 第28页 |
| 2.6.4 黄萎病菌孢子悬浮液的制备 | 第28-29页 |
| 2.6.5 黄萎病菌侵染拟南芥幼苗的方法 | 第29页 |
| 2.6.7 植株中病原菌含量测定方法 | 第29-30页 |
| 2.6.8 叶片DAB染色方法 | 第30页 |
| 2.6.9 叶片相对花青素含量的测定 | 第30页 |
| 2.6.10 叶绿素含量的测定方法 | 第30-31页 |
| 2.6.11 不同浓度花青素下黄萎病菌孢子生长状况比较 | 第31页 |
| 2.6.12 拟南芥基因组DNA提取方法 | 第31-32页 |
| 2.6.13 拟南芥总RNA提取方法 | 第32-33页 |
| 2.6.14 棉花VIGS技术 | 第33页 |
| 2.6.15 图位克隆技术 | 第33-35页 |
| 2.6.16 大丽轮枝菌QRT-PCR定量检测 | 第35-36页 |
| 2.6.17 GUS染色分析 | 第36页 |
| 2.6.18 GUS酶活定量测定 | 第36-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-55页 |
| 3.1 拟南芥vsad1突变位点的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2 vsad1受黄萎病菌侵染的敏感特性分析 | 第40-43页 |
| 3.2.1 在MS上生长的vsad1-1受病菌侵染时的表型分析 | 第40-42页 |
| 3.2.2 在营养土生长的vsad1-1受病菌侵染时的表型分析 | 第42-43页 |
| 3.3 超表达VSAD1基因可以使vsad1-1恢复花青素积累 | 第43-45页 |
| 3.3.1 VSAD1::S1300-OE+GFP载体构建 | 第43-44页 |
| 3.3.2 超表达VSAD1基因可以使vsad1恢复花青素积累 | 第44-45页 |
| 3.4 黄萎病菌可诱导VSAD1基因表达 | 第45-47页 |
| 3.4.1 VSAD1及黄萎病菌相关基因半定量分析 | 第45-46页 |
| 3.4.2 VSAD1：：pCAMBIAI1391-GUS载体构建 | 第46页 |
| 3.4.3 VSAD1基因的GUS染色及酶活分析 | 第46-47页 |
| 3.5 黄萎病菌通过根部入侵拟南芥植株 | 第47-49页 |
| 3.5.1 黄萎病菌侵染过程观察 | 第47-48页 |
| 3.5.2 vsad1体内黄萎病菌数量高于WT | 第48-49页 |
| 3.6 VSAD1基因突变会降低植物组织过氧化氢合成 | 第49-50页 |
| 3.7 花青素混合物抑制大丽轮枝菌生长 | 第50-51页 |
| 3.7.1 葡萄籽花青素抑制大丽轮枝菌生长 | 第50页 |
| 3.7.2 拟南芥叶片提取的花青素可抑制大丽轮枝菌生长 | 第50-51页 |
| 3.8 棉花VSAD1同源基因在抗黄萎病的作用 | 第51-55页 |
| 3.8.1 黄萎病侵染可诱导GhCHS基因表达 | 第52页 |
| 3.8.2 沉默棉花GhCHS基因会减弱植株对黄萎病菌抗性 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 拟南芥VSAD1及其代谢物在抗黄萎病中的作用 | 第55-56页 |
| 4.2 植株体内黄萎病含量测定 | 第56页 |
| 4.3 棉花VSAD1同源基因在抗黄萎病方面的作用 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
