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口蹄疫病毒3C蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

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口蹄疫病毒3C蛋白多克隆抗体的制备与鉴定
论文目录
 
符号说明第1-10页
中文摘要第10-12页
Abstract第12-14页
前言第14-21页
  1.1 口蹄疫简介第14-15页
  1.2 口蹄疫病毒的分子生物学特征第15-17页
    1.2.1 FMDV基因组基本结构第15-16页
    1.2.2 FMDV基因组RNA5'非编码区功能第16-17页
      1.2.2.1 内部核糖体进入位点(IRES)第16页
      1.2.2.2 IRES调控的翻译类型第16-17页
    1.2.3 FMDV基因组RNA3'非编码区功能第17页
    1.2.4 Ploy(A)尾第17页
  1.3 FMDV 3C蛋白酶简介第17-19页
    1.3.1 3C蛋白酶结构第18页
    1.3.2 3C蛋白酶生物学功能第18-19页
      1.3.2.1 3C蛋白酶对多聚蛋白前体裂解的加工作用第18页
      1.3.2.2 3C蛋白酶调控宿主蛋白的翻译第18-19页
      1.3.2.3 3C蛋白酶切割宿主组蛋白第19页
      1.3.2.4 3C蛋白酶抑制干扰素信号通路第19页
  1.4 研究目的及意义第19-21页
材料与方法第21-42页
  2.1 材料第21-27页
    2.1.1 细胞与菌株第21页
    2.1.2 实验动物第21页
    2.1.3 主要仪器第21-23页
    2.1.4 主要药物试剂第23页
    2.1.5 主要试剂配置第23-27页
      2.1.5.1 细菌培养试剂第23-24页
      2.1.5.2 DNA电泳试剂第24-25页
      2.1.5.3 重组蛋白诱导表达及纯化试剂第25-26页
      2.1.5.4 SDS-PAGE电泳试剂第26-27页
      2.1.5.5 Western blotting试剂第27页
  2.2 方法第27-42页
    2.2.1 引物设计第27-29页
    2.2.2 3C基因的扩增及纯化第29-30页
      2.2.2.1 基因扩增第29页
      2.2.2.2 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测第29页
      2.2.2.3 PCR产物胶回收第29-30页
    2.2.3 重组质粒的构建及鉴定第30-33页
      2.2.3.1 双酶切第30-31页
      2.2.3.2 连接转化构建重组质粒第31-33页
    2.2.4 重组蛋白的诱导表达及纯化第33-35页
      2.2.4.1 FMDV 3C基因的原核表达及检测第33页
      2.2.4.2 3C重组蛋白的大量表达及纯化第33-34页
      2.2.4.3 纯化后重组蛋白浓度的测定第34-35页
    2.2.5 3C多克隆抗体的制备第35-36页
      2.2.5.1 3C重组蛋白的纯化及浓缩第35页
      2.2.5.2 3C制备抗血清第35-36页
    2.2.6 多克隆抗体特性检测第36-38页
      2.2.6.1 抗体效价测定第36-37页
      2.2.6.2 Western blotting检测多克隆抗体与蛋白的反应性第37-38页
    2.2.7 多克隆抗体的应用第38-42页
      2.2.7.1 HEK-293T细胞复苏第38页
      2.2.7.2 细胞传代第38-39页
      2.2.7.3 细胞转染第39-40页
      2.2.7.4 将多克隆抗体应用于细胞间接免疫荧光第40页
      2.2.7.5 将多克隆抗体应用于Western blotting检测第40-42页
结果与分析第42-51页
  3.1 FMDV 3C基因的扩增结果第42-43页
  3.2 重组质粒pET-28a-3C的鉴定结果第43页
  3.3 重组蛋白pET-28a-3C的诱导表达结果检测第43-44页
  3.4 重组蛋白的纯化、鉴定及浓度测定第44-46页
  3.5 重组蛋白的超滤及浓缩第46页
  3.6 多克隆抗体特性检测第46-48页
    3.6.1 抗体效价测定第46-47页
    3.6.2 抗体与3C重组蛋白反应性检测第47-48页
  3.7 多克隆抗体的应用第48-51页
    3.7.1 间接免疫荧光检测结果第48-49页
    3.7.2 Western blotting检测结果第49-51页
讨论第51-56页
  4.1 FMDV 3C的原核表达第51-52页
  4.2 重组蛋白的纯化第52-53页
  4.3 3C多克隆抗体的制备第53-54页
  4.4 3C多克隆抗体的鉴定第54-55页
  4.5 制备3C多克隆抗体的意义第55-56页
结论第56-57页
参考文献第57-63页
致谢第63页

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