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猪流行性腹泻病毒的分离及间接ELISA的建立
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猪流行性腹泻病毒的分离及间接ELISA的建立
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-16页
一、综述第16-31页
　　· 猪流行性腹泻的流行与危害第16-18页
　　2 PEDV的分类和结构特征第18-22页
　　　　· 病毒的分类及形态特征第18-19页
　　　　· 病毒的理化特性第19页
　　　　· 病毒的基因组结构和蛋白第19-21页
　　　　· PEDV的基因分型和流行特点第21-22页
　　3 病毒的细胞培养特性第22-23页
　　4 PEDV的病理变化及致病机理第23-24页
　　5 PED诊断方法研究进展第24-29页
　　　　· 病毒的分离与鉴定法第24页
　　　　· 免疫电镜法(IEM)第24页
　　　　· 原位杂交技术(ISH)第24-25页
　　　　· 免疫荧光法第25页
　　　　· 微量血清中和试验第25页
　　　　· 胶体金抗体检测技术第25页
　　　　· RT-PCR法第25-28页
　　　　· ELISA法第28-29页
　　6 PEDV的控制第29-30页
　　7 研究的目的和意义第30-31页
第一章 广西猪流行性腹泻病毒分子流行病学调查第31-50页
　　1 实验材料及主要试剂第31-32页
　　　　· 实验材料第31页
　　　　· 主要试剂及其配制第31-32页
　　2 主要仪器设备第32-33页
　　3 方法与步骤第33-38页
　　　　· 引物设计第33页
　　　　· 粪便样品的处理第33-34页
　　　　· 病毒总RNA提取第34页
　　　　· 反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)第34-35页
　　　　· 电泳第35页
　　　　· 基因克隆第35-36页
　　　　· 样品统计分析第36-37页
　　　　· 序列比对及进化树构建第37-38页
　　4 结果第38-47页
　　　　· RT-PCR检测结果第38-39页
　　　　· 广西猪流行性腹泻病毒流行情况第39-47页
　　5 分析与讨论第47-50页
　　　　· PEDV在广西流行情况分析第47页
　　　　· 本地流行毒株M基因分析第47-48页
　　　　· 本地流行毒株ORF3基因分析第48-50页
第二章 猪流行性腹泻病毒分离鉴定和序列分析第50-73页
　　1 材料与试剂第50-52页
　　　　· 病料第50页
　　　　· 菌种、实验动物、细胞和血清第50页
　　　　· 分子生物学试剂第50-51页
　　　　· 主要仪器与设备第51页
　　　　· 主要试剂配制第51-52页
　　2 方法与步骤第52-57页
　　　　· 样品的处理第52页
　　　　· 引物设计第52-53页
　　　　· 病料中病毒RNA的提取及RT-PCR第53-54页
　　　　· VERO细胞培养第54页
　　　　· VERO细胞胰酶适应性研究第54页
　　　　· 病毒在VERO细胞增殖培养第54页
　　　　· 病毒鉴定第54-57页
　　3 实验结果第57-68页
　　　　· 病毒分离结果第57页
　　　　· RT-PCR鉴定结果第57-58页
　　　　· PEDV-LB株全基因克隆及序列分析结果第58-65页
　　　　· 接种细胞前后ORF3基因的比较结果第65页
　　　　· VERO细胞胰酶适应性结果第65页
　　　　· 病毒的细胞培养结果第65-66页
　　　　· 间接免疫荧光检测结果第66-67页
　　　　· 间接ELISA检测结果第67页
　　　　· TCID_(50)测定结果第67-68页
　　4 分析与讨论第68-73页
　　　　· 病毒分离培养分析第68-69页
　　　　· PEDV-LB株的全基因克隆分析第69-70页
　　　　· PEDV-LB株主要结构基因的分析第70-72页
　　　　· 关于PEDV-LB株的鉴定第72-73页
第三章 猪流行性腹泻病毒N基因部分序列的原核表达及间接ELISA方法的初步建立第73-102页
　　1 实验材料第73-75页
　　　　· 菌种、质粒及抗体第73页
　　　　· 主要试剂及配制第73-75页
　　　　· 主要的仪器设备第75页
　　2 方法与步骤第75-82页
　　　　· 引物设计第75-76页
　　　　· 重组质粒的制备和酶切鉴定第76页
　　　　· 重组原核表达质粒的制备和酶切鉴定第76-77页
　　　　· PEDV N基因片段的原核表达第77-79页
　　　　· N蛋白鼠源抗血清的制备第79页
　　　　· 间接ELISA方法的建立第79-82页
　　3 实验结果第82-97页
　　　　· N基因的PCR克隆与酶切鉴定第82页
　　　　· DNAStar-Protean软件分析第82-83页
　　　　· 目的基因的克隆及酶切鉴定第83-84页
　　　　· 重组表达质粒的酶切鉴定第84页
　　　　· 重组菌的诱导表达和SDS-PAGE第84-85页
　　　　· 目的蛋白表达形式的鉴定结果第85-86页
　　　　· 纯化后NB蛋白的SDS-PAGE第86页
　　　　· 重组蛋白的鉴定第86-88页
　　　　· 纯化后重组蛋白ORF2c浓度的测定第88页
　　　　· 间接ELISA方法的建立第88-97页
　　4 分析与讨论第97-102页
　　　　· 关于重组N蛋白的原核表达与纯化第98-99页
　　　　· 关于重组蛋白的免疫原性第99页
　　　　· 关于间接ELISA诊断方法的建立第99-102页
全文总结第102-103页
参考文献第103-112页
致谢第112-113页
攻读学位期间发表论文情况第113 页

本篇论文共113页，点击这进入下载页面。
 
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