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可删除标记基因表达载体的构建

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可删除标记基因表达载体的构建
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-11页
目录第11-13页
英文缩略词表第13-14页
前言第14-15页
第一章 文献综述第15-22页
  1 转基因生物安全技术的研究第15-16页
  2 Cre/LoxP系统的研究进展第16-22页
    · LoxP 序列第16页
    · Cre 重组酶第16-18页
    · Cre/LoxP系统特性第18-19页
    · Cre/LoxP系统的应用第19-22页
第二章 实验研究第22-57页
  实验一 启动子活性可控的可删除标记基因表达载体的构建第22-32页
    摘要第22页
    1 材料和方法第22-29页
      · 实验材料第22页
      · 引物设计、序列合成第22-23页
      · CMV启动子的克隆第23页
      · CMV启动子基因 P CR 产物的回收第23-24页
      · DsRed2 -1 质粒的提取第24页
      · 中间载体 pCMV-Red 的构建第24-26页
      · 中间载体 pCMV-Red - LoxP 的构建第26-28页
      · Cr e 重组酶基因的人工合成第28页
      · 中间载体 pTRE - tight -Cre 的连接第28页
      · 载体 pCMV-Tt - Cre - LoxP - DsRed 的连接第28-29页
      · 疑似载体 pCMV-Tt - Cre - LoxP - DsRed 的酶切鉴定第29页
    2 结果第29-30页
      · CMV启动子克隆及连接结果第29-30页
      · 引入 LoxP - MCS - LoxP 合成序列的鉴定结果第30页
      · 疑似 pCMV-Tt - Cre - LoxP - DsRed 载体的酶切鉴定结果第30页
    3 讨论第30-32页
  实验二 携带负筛选基因的可删除标记基因表达载体的构建第32-38页
    摘要第32页
    1 材料和方法第32-35页
      · 实验材料第32页
      · T K 序列的合成第32页
      · 载体 pDsRed - CMV-LoxP - TK 的连接第32-33页
      · 酶切鉴定重组载体质粒第33页
      · 新疆细毛羊成纤维细胞的复苏及培养第33-34页
      · 转染前细胞的处理第34页
      · 酶切大量的重组载体 pDsRed - CMV-LoxP- TK第34-35页
      · 用脂质体法转染细胞第35页
    2 结果第35-36页
      · 重组载体 pDsRed -CMV - LoxP - TK 的酶切鉴定结果第35页
      · 重组载体片段 pDsRed - CMV-LoxP - TK 和 pDsRed - CMV -LoxP 转染细胞结果第35-36页
    3 讨论第36-38页
  实验三 构建携带双启动子的可删除标记基因载体第38-44页
    摘要第38页
    1 材料和方法第38-41页
      · 实验材料第38页
      · pEGFP-C1-LoxP-CMV-TK载体的构建第38-39页
      · 重组载体质粒的酶切鉴定第39-40页
      · 转染用重组载体质粒的提取和酶切第40页
      · 重组载体质粒脂质体法转染细毛羊成纤维细胞第40-41页
      · 用脂质体法转染细胞第41页
    2 结果第41-42页
      · 重组载体质粒 pEGFP-C1-LoxP-CMV-TK的酶切鉴定结果第41-42页
      · 重组载体质粒转染成纤维细胞结果第42页
    3 讨论第42-44页
  实验四 携带双报告基因可删除标记基因表达载体的构建第44-49页
    摘要第44页
    1 材料和方法第44-46页
      · 实验材料第44页
      · T K- I RE S 序列合成第44页
      · 特殊序列的合成第44页
      · 载体的构建第44-45页
      · 重组载体质粒 pCMV-LoxP-TK-IRES-Red2 电穿孔法转染成纤维细胞第45-46页
    2 结果第46-47页
      · pCMV-LoxP-TK-IRES-Red2 重组质粒的鉴定第46-47页
      · 细胞转染结果第47页
    3 讨论第47-49页
  实验五 可删除标记基因表达载体功能的检测第49-57页
    摘要第49页
    1 材料和方法第49-53页
      · 实验材料第49页
      · 构建 C re 重组酶真核表达载体第49-50页
      · pIRES2 - EGFP -Cre 载体在细胞内表达的 P CR 鉴定第50-51页
      · 分子水平上 Cr e 重组酶对 pCMV-LoxP-TK-IRES-Red2 载体功能的检测第51-52页
      · pCMV-LoxP-TK-IRES-Red2 的载体质粒片段电穿孔法转染 C 2 C 12 细胞第52页
      · 用 G418 筛选阳性红色荧光细胞第52-53页
      · 对阳性克隆细胞进行 Cr e 重组酶诱导第53页
      · 对阳性克隆细胞进行丙氧鸟苷 ( GC V) 诱导第53页
    2 结果第53-56页
      · pIRES2-EGFP-Cre 载体在细胞内表达的反转录 PCR 鉴定结果第53页
      · 分子水平上 Cre 重组酶对 pCMV-LoxP-TK-IRES-Red2 载体的重组结果第53-54页
      · G418 筛选结果第54页
      · 筛选到的阳性克隆细胞第54页
      · 用 pIRES2-EGFP-Cre 载体转染阳性克隆细胞结果第54-55页
      · 对阳性克隆细胞进行丙氧鸟苷 (GCV) 诱导结果第55-56页
    3 讨论第56-57页
结论第57页
创新点第57-58页
参考文献第58-62页
致谢第62-63页
作者简介第63-64页
导师评阅表第64 页

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