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猪附红细胞体JL-2基因的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的建立
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猪附红细胞体JL-2基因的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的建立
论文目录
摘要
第1-9页
Abstract
第9-11页
前言
第11-16页
1. 研究概况
第11页
2 附红细胞体病的流行特点与防治
第11-12页
3 猪附红细胞体病的诊断方法
第12-14页
· 病原体形态学观察
第12-13页
· 酶联免疫吸附试验
第13页
· 聚合酶链式反应
第13页
· 单克隆抗体技术
第13页
· 环介导等温扩增技术
第13-14页
4 基因文库的筛选策略
第14-15页
5 本研究的目的及意义
第15-16页
材料与方法
第16-30页
1 材料
第16-20页
· 试验样本
第16页
· 载体和宿主菌株
第16页
· 工具酶、试剂盒及其它试剂
第16页
· 主要仪器
第16-17页
· 试验所用主要试剂及培养基的配制方法
第17-20页
2 方法
第20-30页
· 猪附红细胞体基因组文库的大量扩增
第20页
· 大肠杆菌感受态细胞的制备
第20-21页
· 猪附红细胞体基因组文库的转化
第21页
· 猪附红细胞体基因组文库重组子的筛选
第21-22页
· 插入基因的生物信息学分析
第22页
· 猪附红细胞体JL-2基因片段引物的设计与合成
第22页
· 目的片段的PCR扩增
第22-23页
· PCR产物的纯化与回收
第23页
· 猪附红细胞体JL-2基因片段的克隆与鉴定
第23-24页
· 猪附红细胞体JL-2基因片段原核表达载体的构建与鉴定
第24-25页
· 重组表达质粒的诱导表达
第25页
· 表达产物的SDS-PAGE电泳
第25-26页
2.13 表达产物的Western blotting分析
第26页
· 重组蛋白的纯化
第26-27页
· 重组蛋白间接ELISA方法的建立
第27-30页
结果
第30-46页
1 猪附红细胞体基因组文库的转化
第30页
2 猪附红细胞体基因组文库重组子的筛选
第30-32页
3 猪附红细胞体JL-2基因的生物信息分析
第32-34页
4 猪附红细胞体JL-2基因片段的PCR扩增
第34页
5 重组克隆质粒的PCR及酶切鉴定
第34-35页
6 重组表达质粒的PCR及酶切鉴定
第35-36页
7 重组表达质粒的诱导表达
第36-37页
8 表达产物的Western blotting分析
第37-38页
9 重组蛋白的可溶性分析
第38-39页
10 重组蛋白的纯化
第39页
11 间接ELISA检测方法的建立
第39-46页
· 重组蛋白抗原最佳包被浓度与血清稀释度的筛选
第39-40页
· 重组蛋白抗原最佳包被条件的筛选
第40-41页
· 最适封闭液及最佳封闭时间的筛选
第41-42页
· 血清最佳作用时间的筛选
第42-43页
· 酶标二抗最佳稀释倍数及作用时间的筛选
第43页
· 底物最适显色时间的筛选
第43-44页
· 间接ELISA阴、阳性临界值的确定
第44页
· 特异性试验结果
第44-45页
· 重复性试验结果
第45页
· 临床样本检测结果
第45-46页
讨论
第46-49页
1. 基因组文库的筛选方法
第46-47页
2. 基因功能的研究策略
第47-48页
3. 重组蛋白的表达、纯化及ELISA试验
第48-49页
结论
第49-50页
参考文献
第50-54页
致谢
第54-55页
作者简介
第55 页
本篇论文共
55
页,
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