论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 胡萝卜软腐果胶杆菌概述 | 第10页 |
| 1.1.1 胡萝卜软腐果胶杆菌的介绍 | 第10页 |
| 1.1.2 胡萝卜软腐果胶杆菌的致病过程 | 第10页 |
| 1.2 Cpx信号转导系统概述 | 第10-13页 |
| 1.2.1 双组份信号转导系统 | 第10-11页 |
| 1.2.2 Cpx信号转导系统 | 第11-13页 |
| 1.2.3 调控蛋白CpxR | 第13页 |
| 1.3 重组蛋白表达及常见的纯化方法 | 第13-17页 |
| 1.3.1 亲和标签在蛋白表达中的应用 | 第13-14页 |
| 1.3.2 常见的蛋白纯化方法 | 第14-17页 |
| 1.4 蛋白结晶方法及影响因素 | 第17-19页 |
| 1.4.1 常见的结晶方法 | 第17-18页 |
| 1.4.2 影响结晶的因素 | 第18-19页 |
| 1.5 试验方案设计 | 第19-22页 |
| 1.5.1 试验目的和意义 | 第19-20页 |
| 1.5.2 试验的主要内容 | 第20-21页 |
| 1.5.3 试验流程 | 第21-22页 |
| 第2章 cpxR基因的克隆与表达 | 第22-40页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料、试剂和仪器 | 第22-26页 |
| 2.2.1 菌种和表达载体 | 第22页 |
| 2.2.2 试验试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要试剂的配制 | 第23-25页 |
| 2.2.4 试验所用试剂盒 | 第25-26页 |
| 2.2.5 试验仪器 | 第26页 |
| 2.3 试验方法 | 第26-34页 |
| 2.3.1 胡萝卜软腐果胶杆菌cpxR基因的扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组表达载体pET-15b-CpxR的构建 | 第27-32页 |
| 2.3.3 重组表达载体在大肠杆菌中的表达 | 第32-33页 |
| 2.3.4 融合蛋白CpxR的SDS-PAGE分析 | 第33-34页 |
| 2.4 试验结果 | 第34-39页 |
| 2.4.1 胡萝卜软腐果胶杆菌cpxR基因克隆 | 第34-35页 |
| 2.4.2 重组表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.4.3 阳性重组克隆鉴定 | 第36-38页 |
| 2.4.4 重组表达载体在大肠杆菌中的表达及条件优化 | 第38-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 CpxR蛋白性质与功能预测 | 第40-48页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 生物信息学分析工具 | 第40-41页 |
| 3.3 CpxR蛋白的生化性质 | 第41-46页 |
| 3.3.1 胡萝卜软腐果胶杆菌CpxR蛋白的氨基酸序列 | 第41页 |
| 3.3.2 保守结构的预测 | 第41-42页 |
| 3.3.3 二级结构的预测 | 第42页 |
| 3.3.4 同源性分析 | 第42-43页 |
| 3.3.5 疏水性分析 | 第43-44页 |
| 3.3.6 跨膜区预测 | 第44页 |
| 3.3.7 信号肽预测 | 第44-45页 |
| 3.3.8 蛋白定位预测 | 第45页 |
| 3.3.9 高级结构预测 | 第45-46页 |
| 3.4 CpxR蛋白的功能预测 | 第46-47页 |
| 3.4.1 KEGG pathway检索 | 第46-47页 |
| 3.4.2 KEGG brite检索 | 第47页 |
| 3.5 本章小结 | 第47-48页 |
| 第4章 CpxR蛋白的纯化 | 第48-60页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 试验试剂和仪器 | 第48-51页 |
| 4.2.1 试验试剂 | 第48页 |
| 4.2.2 主要试剂的配制 | 第48-50页 |
| 4.2.3 试验仪器 | 第50-51页 |
| 4.3 试验方法 | 第51-54页 |
| 4.3.1 CpxR蛋白的表达 | 第51页 |
| 4.3.2 镍离子亲和层析纯化融合蛋白 | 第51-52页 |
| 4.3.3 蛋白浓缩 | 第52页 |
| 4.3.4 CpxR蛋白定量(Bradford法) | 第52-53页 |
| 4.3.5 快速蛋白液相色谱分析 | 第53页 |
| 4.3.6 CpxR的凝血酶酶切分析 | 第53页 |
| 4.3.7 Western blot分析 | 第53-54页 |
| 4.3.8 镍离子亲和层析纯化无标签的CpxR蛋白 | 第54页 |
| 4.4 试验结果 | 第54-58页 |
| 4.4.1 镍离子亲和层析纯化CpxR蛋白 | 第54-55页 |
| 4.4.2 CpxR蛋白定量 | 第55-56页 |
| 4.4.3 分子筛层析纯化CpxR蛋白 | 第56-57页 |
| 4.4.4 CpxR的凝血酶酶切及Western blot分析 | 第57页 |
| 4.4.5 镍柱纯化无标签的CpxR蛋白 | 第57-58页 |
| 4.5 本章小结 | 第58-60页 |
| 第5章 CpxR蛋白二级结构预测及其结晶条件初筛 | 第60-66页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 试验材料、试剂和结晶试剂盒 | 第60页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第60页 |
| 5.2.2 主要试剂及结晶试剂盒 | 第60页 |
| 5.3 试验方法 | 第60-62页 |
| 5.3.1 CpxR蛋白浓度测定 | 第60页 |
| 5.3.2 CpxR蛋白圆二色谱分析 | 第60-61页 |
| 5.3.3 结晶蛋白样品的制备 | 第61页 |
| 5.3.4 微晶体条件的筛选 | 第61页 |
| 5.3.5 大晶体条件的筛选 | 第61-62页 |
| 5.4 试验结果 | 第62-65页 |
| 5.4.1 CpxR蛋白二级结构 | 第62页 |
| 5.4.2 CpxR蛋白的稳定性 | 第62-64页 |
| 5.4.3 CpxR蛋白的热恢复性能 | 第64页 |
| 5.4.4 CpxR蛋白微晶体的筛选 | 第64-65页 |
| 5.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 攻读研究生期间所发表的论文 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
