论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-17页 |
| 一文献综述 | 第7页 |
| （一） RNA 干涉研究进展 | 第7-14页 |
| 1.1 RNA 干涉的发现 | 第7页 |
| 1.2 RNA 干涉的机制 | 第7-8页 |
| 1.3 RNA 干涉的特点 | 第8-9页 |
| 1.4 RNA 干涉的生物学意义 | 第9页 |
| 1.5 RNA 干涉的应用 | 第9-13页 |
| 1.6 RNA 干涉研究前景 | 第13-14页 |
| （二） 乙酰化酶p300 研究进展 | 第14-16页 |
| 2.1 p300 的结构 | 第14页 |
| 2.2 p300 的功能 | 第14-15页 |
| 2.3 p300 的作用机制 | 第15-16页 |
| 二论文的研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-29页 |
| 一 实验材料 | 第17-18页 |
| （一） 细胞培养及其培养试剂 | 第17页 |
| （二） 原始质粒 | 第17页 |
| （三） 细胞转染及体外 RNA 转录试剂 | 第17页 |
| （四） RT－PCR 相关试剂 | 第17页 |
| （五） 实验设备及仪器 | 第17-18页 |
| 二 实验方法 | 第18-29页 |
| （一） 质粒的大量制备 | 第18-19页 |
| （二） 磷酸钙瞬时转染 | 第19-20页 |
| （三） 荧光素酶报告基因检测 | 第20页 |
| （四） 选择siRNA 序列 | 第20-21页 |
| （五） PCR 获得体外转录模板 | 第21-22页 |
| （六） 体外转录获得dsRNA | 第22-23页 |
| （七） ShortCut RNase III 酶切dsRNA 获得siRNAs | 第23页 |
| （八） 293T 细胞培养及siRNA 转染细胞 | 第23-24页 |
| （九） 哺乳动物细胞总 RNA 提取 | 第24-25页 |
| （十） RT－PCR | 第25-26页 |
| （十一） SDS－PAGE 电泳及 Western blotting | 第26-27页 |
| （十二） 免疫荧光检测 | 第27-29页 |
| 第三章 结果与分析 | 第29-38页 |
| 一乙酰化酶p300 和去乙酰化酶对 IL-12 转录的调控 | 第29-31页 |
| （一） 乙酰化酶对 IL-12 启动子活性的作用 | 第29-30页 |
| （二） 去乙酰化酶对 IL-12 启动子活性的作用 | 第30-31页 |
| 二 应用构建siRNA 表达质粒方法引发 RNAi | 第31-33页 |
| 三 应用 RNase III 酶切dsRNA 方法引发 RNAi | 第33-38页 |
| （一） 获得siRNAs 混合片段 | 第33-36页 |
| 1.1 PCR 扩增体外转录模板 | 第33页 |
| 1.2 体外转录获得dsRNA | 第33-35页 |
| 1.3 ShortCut RNase III 酶切获得siRNAs 混合片段 | 第35-36页 |
| （二） RNAi 抑制p300 基因表达的 RT－PCR 结果分析 | 第36-38页 |
| 第四章 讨论 | 第38-42页 |
| 一 选择合适的 RNA 干涉方法 | 第38页 |
| 二 RNA 干涉实验成功的关键因素 | 第38-39页 |
| 三 RNA 干涉效应的检测方法 | 第39-40页 |
| 四 进一步研究p300 对 IL-12 启动子活性的调控机制 | 第40-42页 |
| 第五章 结论 | 第42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
