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玉米ZmPOT基因TALEN敲除和过表达载体的构建及遗传转化

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玉米ZmPOT基因TALEN敲除和过表达载体的构建及遗传转化
论文目录
 
中文摘要第1-6页
Abstract第6-11页
1 文献综述第11-28页
  · 玉米容重的研究进展第11-13页
    · 容重的概念第11-12页
    · 玉米容重的研究意义第12-13页
    · 玉米容重与产量和品质的关系第13页
      · 籽粒容重与产量和品质的关系第13页
      · 籽粒容重差异的主要来源第13页
  · 基因修饰第13-21页
    · 基因修饰的概念及研究进展第13-15页
    · ZFN基因组编辑技术第15页
    · TALEN基因组编辑技术第15-20页
      · TALEN的结构与原理第15-17页
      · TALEN设计与构建方法第17-18页
      · TALEN诱变效率的检测方法第18-19页
      · TALEN的应用第19-20页
    · CRISPR/Cas9基因组编辑技术第20-21页
  · 玉米的转基因技术第21-25页
    · 转基因玉米的研究进展第21-22页
    · 玉米遗传转化的受体第22-24页
      · 原生质体第22页
      · 胚性愈伤组织第22-23页
      · 幼胚第23页
      · 茎尖分生组织第23-24页
      · 子房、花粉第24页
    · 玉米转化方法第24-25页
      · 农杆菌介导法第24页
      · 基因枪法第24-25页
      · 花粉管通道法第25页
  · POT家族蛋白第25-27页
    · POT家族蛋白研究现状第25-27页
      · 动物中POT家族蛋白的相关研究第25-26页
      · 植物中POT家族蛋白的相关研究第26-27页
  · 研究目的及意义第27-28页
2 材料与方法第28-58页
  · 材料第28-31页
    · 植物材料第28页
    · 菌株与载体第28页
    · 主要试剂及试剂盒第28-29页
    · 常用培养基第29-30页
    · 常用基本溶液第30页
    · 器材及仪器第30-31页
  · 实验方法第31-58页
    · 生物信息学分析第31页
    · TALEN敲除载体的构建第31-37页
      · TALEN左右臂识别序列设计第31-32页
      · TALEN左右臂载体构建第32-34页
      · 敲除载体的构建第34-37页
    · 过表达载体的构建第37-45页
      · 水稻谷蛋白基因Gtl启动子的克隆第37-39页
      · 中间载体pGtl-CUB的构建第39-41页
      · 目的基因的克隆第41-43页
      · ZmPOT过表达载体的构建第43-45页
    · ZmPOT敲除载体及过表达载体转化农杆菌第45-46页
      · 农杆菌感受态的制备第45页
      · 冻融化转化农杆菌第45-46页
    · 农杆菌介导TALEN敲除载体在玉米愈伤组织中的遗传转化第46-48页
      · 玉米愈伤组织的培养第46页
      · 玉米愈伤组织侵染及共培养第46-47页
      · 玉米愈伤组织的清洗及杀菌第47页
      · 玉米愈伤组织的恢复及筛选培养第47页
      · 玉米愈伤组织的分化培养第47页
      · 炼苗及移栽第47-48页
    · 农杆菌介导过表达载体在玉米幼胚中的遗传转化第48-49页
      · 幼胚的准备第48页
      · 农杆菌的准备第48页
      · 侵染及后期培养第48-49页
    · T_0代转基因植株的分子检测第49-52页
      · 玉米基因组DNA的提取第49页
      · TALEN转基因植株T_0代转基因植株分子检测检测第49-51页
      · 过表达载体转基因植株T_0代分子检测第51-52页
    · TALEN转基因植株T_1代转基因植株分子检测检测第52-58页
      · 用FokI的引物PCR检测第52页
      · T7E1酶切检测第52-54页
      · qRT-PCR检测转基因情况第54-57页
      · TALEN结果检测第57-58页
    · TALEN T_1代转基因植株相关表型鉴定第58页
3 结果与分析第58-81页
  · ZmPOT生物信息学分析结果第58-60页
  · TALEN植物表达載体的构建第60-66页
    · TALEN靶位点设计第60-61页
    · TALEN左右臂的构建第61-63页
    · TALEN双元启动子植物表达载体的构建第63-66页
  · ZmPOT过表达载体的构建第66-72页
    · ZmPOT基因的克隆第66-68页
    · 中间载体pGtl-CUB的构建第68-70页
    · ZmPOT过表达载体的构建第70-72页
  · 农杆菌介导的玉米遗传转化第72-74页
    · 以玉米愈伤组织为受体农杆菌介导的TALEN敲除载体的遗传转化第72-73页
      · 玉米胚性愈伤组织的培育第72页
      · 玉米愈伤组织的转化第72-73页
    · ZmPOT过表达载体的遗传转化第73-74页
  · 转基因植株的检测第74-80页
    · T_0代转基因植株的PCR检测第74-76页
      · TALEN敲除载体转基因植株T_0代检测第74-75页
      · 过表达载体转基因植株T_0代检测第75-76页
    · TALEN敲除载体转基因植株T_1代检测第76-80页
  · TALEN T_1代转基因植株相关表型测定第80-81页
4 讨论第81-85页
  · ZmPOT基因功能的预测及启动子的选择第81-82页
  · 玉米受体系统的影响第82-83页
  · TALEN打靶效率检测及其影响因素第83-84页
  · TALEN的应用第84-85页
5 小结第85页
6 下一步研究计划第85-86页
参考文献第86-92页
致谢第92-93页
附录第93页

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