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苦荞次生代谢关键酶F3H的原核表达与多克隆抗体制备
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苦荞次生代谢关键酶F3H的原核表达与多克隆抗体制备
论文目录
摘要
第1-6页
ABSTRACT
第6-11页
第一章 文献综述
第11-27页
· 植物次生代谢简介
第11-18页
· 植物次生代谢产物的分类
第11页
· 植物次生代谢产物的功能研究
第11-14页
· 植物次生代谢途径的研究进展
第14-16页
· 植物次生代谢的调节
第16-18页
· 黄酮类化合物的生物学研究进展
第18-21页
· 黄酮类化合物的结构
第18页
· 黄酮类化合物的生理活性
第18-19页
· 黄酮类化合物的合成途径
第19-20页
· 黄酮类化合物代谢途径的主要关键酶
第20-21页
· 黄酮-3-羟化酶研究进展
第21-23页
· F3H 基因的结构与功能
第21页
· F3H 蛋白的催化机制研究
第21-22页
· F3H 蛋白的表达调控
第22-23页
· 原核表达系统及包涵体纯化
第23-25页
· 外源基因表达系统
第23页
· 包涵体简介
第23页
· 包涵体形成因素
第23-25页
· 包涵体蛋白的溶解
第25页
· 包涵体蛋白的复性
第25页
· 多克隆抗体制备
第25-26页
· 研究的目的、意义及主要研究内容
第26-27页
· 研究的目的和意义
第26页
· 主要研究内容
第26-27页
第二章 苦荞黄酮-3-羟化酶序列的生物信息学分析
第27-33页
· 实验材料
第27页
· 实验方法
第27页
· 苦荞黄酮-3-羟化酶基因的序列分析
第27页
· 苦荞黄酮-3-羟化酶的功能及结构预测
第27页
· 苦荞黄酮-3-羟化酶系统发育树的构建
第27页
· 实验结果
第27-31页
· 苦荞黄酮-3-羟化酶基因序列的分析
第27-28页
· 苦荞黄酮-3-羟化酶的功能及结构预测结果
第28-30页
· 苦荞 F3H 蛋白的系统发育树分析
第30-31页
· 讨论
第31-33页
第三章 苦荞黄酮-3-羟化酶原核表达载体的构建
第33-40页
· 实验材料与试剂
第33-34页
· 菌种与质粒
第33页
· 主要的工具酶及试剂
第33页
· 主要实验仪器
第33页
· 主要溶液的配方
第33-34页
· 实验方法
第34-38页
· 引物设计
第34页
· 质粒 pET47b 与 pTriplEx2-TrF3H 的提取
第34-35页
· 黄酮-3-羟化酶基因截短体(TrF3H)序列的 PCR 扩增
第35页
· PCR 产物及载体 pET47b 的双酶切
第35页
· 切胶回收双酶切产物
第35-36页
· 载体与目的片段连接
第36页
· 连接产物转化 Top10
第36-37页
· 原核表达载体的筛选与鉴定
第37-38页
· 实验结果与分析
第38-39页
· 目标片段的 PCR 扩增
第38页
· 重组表达载体的双酶切鉴定
第38-39页
· 讨论
第39-40页
第四章 目的基因的诱导表达及亲和纯化
第40-50页
· 实验材料
第40-41页
· 菌种与质粒
第40页
· 主要试剂
第40页
· 主要溶液的配制
第40-41页
· 主要实验仪器
第41页
· 实验方法
第41-45页
· 重组质粒转化表达载体
第41页
· 目的基因的诱导表达
第41-42页
· 目的蛋白 SDS-PAGE 检测
第42-44页
· 目的蛋白的可溶性分析
第44页
· 包涵体纯化
第44页
· 目的蛋白的钴离子螯合层析
第44-45页
· 包涵体复性
第45页
· 目的蛋白的 His-tag 鉴定
第45页
· 实验结果与分析
第45-48页
· 重组蛋白的诱导表达
第45-46页
· 重组蛋白的表达形式分析
第46-47页
· 包涵体的纯化
第47页
· 目的蛋白的 His 标签鉴定
第47-48页
· 讨论
第48-50页
· 原核表达宿主的选择
第48-49页
· 包涵体复性
第49页
· 目的蛋白的纯化
第49-50页
第五章 TrF3H 的多克隆抗体制备及 western blotting 检测
第50-54页
· 实验材料
第50-51页
· 实验试剂
第50页
· 材料
第50页
· 主要实验仪器
第50页
· 主要溶液配制
第50-51页
· 实验方法
第51-52页
· 重组蛋白的浓度测定及多克隆抗体制备
第51页
· 苦荞中 F3H 的 Western blotting 分析
第51-52页
· 实验结果与分析
第52-53页
· 重组蛋白的浓度测定
第52页
· 多克隆抗体的 Western blotting 检测
第52-53页
· 讨论
第53-54页
第六章 总结与展望
第54-55页
· 总结
第54页
· 展望
第54-55页
参考文献
第55-62页
附录
第62-63页
致谢
第63-64页
作者简介
第64 页
本篇论文共
64
页,
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