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基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达vvIBDV VP2基因的研究

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基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达vvIBDV VP2基因的研究
论文目录
 
摘要第10-12页
Abstract第12-14页
1 引言第14-20页
  · 新城疫病毒(NDV)第14-15页
    · NDV 简介第14页
    · NDV 的形态学特征第14-15页
    · NDV 的基因组结构第15页
  · 反向遗传操作技术第15-16页
  · NDV 活载体疫苗简介第16页
  · IBDV 简介第16-18页
    · IBD 简介第16-17页
    · IBDV 的形态及基因组结构第17-18页
    · IBDV 的主要保护性抗原第18页
    · 免疫防治第18页
  · 内部核糖体进入位点第18-19页
  · 本研究的目的与意义第19-20页
2 材料第20-23页
  · 病毒株、细胞株和质粒第20页
  · 培养基及生化试剂第20页
  · 引物第20-21页
  · 鸡胚第21页
  · 主要仪器和设备第21-23页
3 方法第23-36页
  · vvIBDV VP2 基因克隆与序列分析第23-25页
    · vvIBDV VP2 基因的 PCR 扩增第23页
    · PCR 产物的纯化第23页
    · vvIBDV VP2 基因克隆的序列测定第23-25页
  · IRES 基因克隆与序列分析第25-26页
    · IRES 基因的 PCR 扩增第25页
    · PCR 产物的纯化第25页
    · IRES 基因克隆的序列测定第25-26页
  · VP2(BamH I)基因克隆与序列分析第26-27页
    · VP2(BamH I)基因的 PCR 扩增第26页
    · PCR 产物的纯化第26页
    · VP2(BamH I)基因克隆的序列测定第26-27页
  · pMD-VP2-IRES-VP2(BamH I)质粒的构建第27-30页
    · pMD-VP2-IRES 质粒的构建第27-29页
    · pMD-VP2-IRES-VP2(BamH I)质粒的构建第29-30页
  · 表达 VP2-IRES-VP2(BamH I)重组病毒基因组全长 cDNA 的构建第30-32页
    · VP2-IRES-VP2(BamH I)基因片段与重组 NDV 病毒基因组转录载体片段的制备第30页
    · VP2-IRES-VP2(BamH I)基因片段与重组 NDV 病毒基因组转录载体片段连接第30-31页
    · 重组质粒的鉴定第31-32页
  · 表达 vvIBDV VP2 基因重组病毒基因组全长 cDNA 的构建第32-33页
    · rClone30-VP2 片段的制备第32页
    · rClone30-VP2 片段连接第32-33页
    · 重组质粒的鉴定第33页
  · 重组 NDV 的拯救及鉴定第33-36页
    · 重组 NDV 的拯救第33-34页
    · 重组 NDV 的 RT-PCR 鉴定第34页
    · 拯救后的重组 NDV TCID50测定第34页
    · 重组 NDV 的细胞增殖稳定性第34页
    · 间接免疫荧光检测(IFA)重组病毒 VP2 基因的表达第34页
    · 重组病毒 VP2 基因的 mRNA 水平的检测第34-36页
4 实验结果第36-51页
  · vvIBDV VP2 基因克隆第36-37页
    · vvIBDV VP2 基因的 PCR 扩增第36页
    · PCR 产物的纯化第36-37页
    · VP2 基因的序列测定第37页
  · IRES 基因克隆第37-39页
    · IRES 基因的 PCR 扩增第37-38页
    · PCR 产物纯化第38页
    · IRES 基因的序列测定第38-39页
  · VP2(BamH I)基因克隆第39-40页
    · VP2(BamH I)基因的 PCR 扩增第39页
    · PCR 产物纯化第39-40页
    · VP2(BamH I)基因的序列测定第40页
  · pMD-VP2-IRES 质粒的构建和阳性重组质粒的鉴定第40-42页
    · IRES 基因片段和 pMD-VP2 载体片段的制备第40-41页
    · 阳性重组质粒的鉴定第41-42页
  · pMD-VP2-IRES-VP2 重组质粒的构建和阳性重组质粒的鉴定第42-43页
    · VP2(BamH I)基因片段和 pMD-VP2-IRES 载体片段的制备第42页
    · 阳性重组质粒的鉴定第42-43页
  · 重组 NDV rClone30-VP2-IRES-VP2 基因组转录载体的构建和阳性重组质粒的鉴定第43-45页
    · VP2-IRES-VP2 基因片段和 rClone30 载体片段的制备第43-44页
    · 阳性重组质粒的鉴定第44-45页
  · 重组 NDV rClone30-VP2 基因组载体的构建和阳性重组质粒的鉴定第45-46页
    · rClone30-VP2 载体片段的制备第45页
    · 阳性重组质粒的鉴定第45-46页
  · 重组 NDV 的拯救及鉴定第46-48页
    · 重组 NDV 的拯救第46-47页
    · 重组 NDV RT-PCR 鉴定第47-48页
  · 重组 NDV 细胞增殖稳定性第48页
  · IFA 重组病毒表达鉴定第48-49页
  · 重组病毒尿囊液的 VP2 基因 mRNA 水平检测第49-51页
5 讨论第51-54页
  · vvIBDV VP2 基因的选择第51页
  · 内部核糖体进入位点的选择第51-52页
  · 外源基因的插入位置的选择第52页
  · 重组 NDV 的构建及拯救第52页
  · 重组病毒的增殖能力第52-53页
  · 重组病毒 VP2 基因表达量的比较第53-54页
6 结论第54-55页
致谢第55-56页
参考文献第56-61页
附录 A第61-62页
附录 B第62-63页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第63 页

本篇论文共63页,点击这进入下载页面
 
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