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重组人生长激素在大肠杆菌中分泌表达及其纯化的研究

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重组人生长激素在大肠杆菌中分泌表达及其纯化的研究
论文目录
 
摘要第1-4页
Abstract第4-5页
目录第5-8页
缩略词表第8-9页
第一部分:前言第9-12页
第二部分:材料与方法第12-25页
  ·材料第12-16页
    ·菌种第12页
    ·质粒第12页
    ·培养基第12页
    ·缓冲液第12-13页
    ·工具酶第13-14页
    ·抗体第14页
    ·试剂及试剂盒第14-15页
    ·仪器设备第15-16页
    ·实验动物第16页
  ·方法第16-25页
    ·大肠杆菌质粒的小量提取第16页
    ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第16-17页
    ·DNA的限制性内切酶的双酶切第17页
    ·DNA片段的连接第17页
    ·DNA电泳分离第17页
    ·DNA片段的回收和纯化第17-18页
    ·DNA PCR扩增第18-19页
    ·蛋白质的诱导表达第19页
    ·表达产物的鉴定及表达水平分析第19页
    ·蛋白质存在性质的鉴定第19-20页
    ·重组蛋白在摇瓶水平表达条件的优化第20-21页
    ·工程菌的发酵第21-22页
    ·蛋白质的定量第22页
    ·兔抗hGH多克隆抗体的制备第22页
    ·抗体效价的测定——免疫双扩散法第22-23页
    ·蛋白质纯化第23-24页
    ·免疫印迹实验第24页
    ·蛋白质银染纯度分析第24-25页
第三部分:rhGH分泌型表达质粒的构建及其鉴定第25-41页
  ·引言第25页
  ·结果和分析第25-36页
    ·rhGH分泌型表达质粒pET-ompA_3-hGH的构建第25-28页
    ·重组质粒pET-ompA_3-hGH的鉴定第28-29页
    ·rhGH标准品的定量第29-31页
    ·溶菌酶浓度对周质蛋白提取效率的影响第31-32页
    ·重组质粒pET-ompA_3-hGH在BL21(DE3)中表达产物的鉴定第32-33页
    ·重组质粒pET-hGH的构建、鉴定和表达第33-36页
  ·讨论第36-40页
  ·本章小结第40-41页
第四部分:工程菌在摇瓶水平诱导表达条件的优化第41-49页
  ·引言第41页
  ·结果和分析第41-46页
    ·培养基成分对rhGH分泌表达量的影响第41-43页
    ·诱导条件的优化第43-45页
    ·工程菌优选条件下的生长曲线第45-46页
  ·讨论第46-47页
  ·本章小结第47-49页
第五部分:工程菌的发酵第49-55页
  ·引言第49-50页
  ·结果与分析第50-53页
    ·工程菌的稳定性检测第50-52页
    ·工程菌在发酵水平目的蛋白表达情况第52-53页
  ·讨论第53-54页
  ·本章小结第54-55页
第六部分:分泌型表达rhGH的纯化及其性质的研究第55-62页
  ·引言第55页
  ·结果与分析第55-60页
    ·抗体的纯化及亲和层析柱的制备第55-56页
    ·抗体亲和层析一步纯化周质中的rhGH第56-58页
    ·纯化rhGH纯度的鉴定第58-59页
    ·纯化rhGH相对分子量的测定第59-60页
    ·纯化rhGH免疫活性的检测第60页
  ·讨论第60-61页
  ·本章小结第61-62页
第七部分:总结第62-64页
  ·本研究主要获得的结果第62页
  ·本论文的创新之处第62-63页
  ·需进一步研究的问题第63-64页
论文部分参考文献第64-69页
综述:rhGH在大肠杆菌周质中的分泌表达第69-79页
致谢第79-80页
发表学术论文目录第80页

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