论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| abstract | 第6-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-17页 |
| 1.1 研究入侵机制对球虫病防控具有重要意义 | 第12页 |
| 1.2 顶复器门原虫具有高度保守的入侵宿主细胞机制 | 第12-13页 |
| 1.3 顶膜抗原1是顶复器门原虫入侵宿主细胞的关键蛋白 | 第13-17页 |
| 1.3.1 顶复器门原虫AMA1具有保守的功能结构域 | 第13-14页 |
| 1.3.2 AMA1是顶复器门原虫入侵宿主细胞的关键分子 | 第14页 |
| 1.3.3 AMA1与棒状体颈部蛋白复合体形成MJ是虫体成功入侵宿主细胞的关键 | 第14-16页 |
| 1.3.4 AMA1抗体可抑制球虫子孢子入侵细胞,但机制不明 | 第16-17页 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫鸡胚原代成纤维细胞培养模型的建立 | 第17-25页 |
| 2.1 引言 | 第17页 |
| 2.2 材料与方法 | 第17-22页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第17页 |
| 2.2.2 实验虫株 | 第17-18页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第18页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第18页 |
| 2.2.5 试剂配制方法 | 第18-19页 |
| 2.2.6 鸡胚原代成纤维细胞的制备 | 第19-20页 |
| 2.2.7 子孢子的收集与纯化 | 第20-22页 |
| 2.3 结果 | 第22-23页 |
| 2.3.1 鸡胚原代成纤维细胞的形态学观察 | 第22页 |
| 2.3.2 鸡胚原代成纤维细胞纯化后的形态学观察 | 第22页 |
| 2.3.3 不同时间段子孢子入侵鸡胚原代成纤维细胞发育情况 | 第22-23页 |
| 2.4 讨论 | 第23-25页 |
| 第三章 顶膜抗原1不同结构域对球虫子孢子入侵的影响 | 第25-46页 |
| 3.1 引言 | 第25-26页 |
| 3.2 材料与方法 | 第26-37页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第26页 |
| 3.2.2 实验虫株、载体及细胞 | 第26页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第26-27页 |
| 3.2.4 主要实验仪器 | 第27页 |
| 3.2.5 主要实验试剂的配制 | 第27-28页 |
| 3.2.6 柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 3.2.7 柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA的合成 | 第29页 |
| 3.2.8 EtAMA1-DⅠ克隆与鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.9 重组原核表达质粒pGEX-4T-2-EtAMA1-DⅠ的构建与鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2.10 原核重组表达质粒pGEX-4T-2-EtAMA1-DⅠ表达重组蛋白 | 第31-33页 |
| 3.2.11 pGEX-4T-2-EtAMA1-DⅠ表达重组蛋白的纯化 | 第33页 |
| 3.2.12 pGEX-4T-2-EtAMA1-DⅠ重组蛋白多克隆抗体的制备与纯化 | 第33-34页 |
| 3.2.13 EtAMA1不同结构域对入侵宿主细胞的影响 | 第34-36页 |
| 3.2.14 滑行运动 | 第36页 |
| 3.2.15 粘附实验 | 第36-37页 |
| 3.3 结果 | 第37-44页 |
| 3.3.1 重组真核质粒的构建及鉴定 | 第37页 |
| 3.3.2 EtAMA1-DⅠ基因的克隆 | 第37-38页 |
| 3.3.3 原核重组表达质粒pGEX-4T-2-EtAMA1-DⅠ的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.4 重组蛋白rEtAMA1-DⅠ的表达及存在形式分 | 第39页 |
| 3.3.5 重组蛋白GST-EtAMA1-DⅠ的纯化 | 第39-41页 |
| 3.3.6 体外抑制实验结果 | 第41-43页 |
| 3.3.7 滑行运动 | 第43页 |
| 3.3.8 粘附实验 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 EtAMA1-DⅠ与棒状体颈部蛋白2互作关系的研究 | 第46-56页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 材料和方法 | 第46-50页 |
| 4.2.1 虫株、载体和细胞 | 第46-47页 |
| 4.2.2 主要实验试剂 | 第47页 |
| 4.2.3 主要实验仪器 | 第47页 |
| 4.2.4 EtRON2和EtAMA1基因的克隆 | 第47-49页 |
| 4.2.5 重组真核表达质粒的构建 | 第49页 |
| 4.2.6 重组质粒转染BHK细胞 | 第49页 |
| 4.2.7 IFA鉴定重组真核表达质粒在BHK细胞中的表达情况 | 第49页 |
| 4.2.8 双分子荧光互补实验(BiFC) | 第49-50页 |
| 4.3 结果 | 第50-53页 |
| 4.3.1 EtAMA1-DⅠ和EtRON2的PCR扩增 | 第50-51页 |
| 4.3.2 重组真核质粒的构建及鉴定 | 第51页 |
| 4.3.3 IFA验证真核重组质粒在BHK的表达 | 第51-52页 |
| 4.3.4 BiFC检测蛋白间的相互作用 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-56页 |
| 第五章 EtAMA1与宿主细胞互作蛋白的筛选 | 第56-63页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 材料与方法 | 第56-59页 |
| 5.2.1 虫株和细胞 | 第56页 |
| 5.2.2 主要实验试剂 | 第56-57页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第57页 |
| 5.2.4 含GST标签的EtAMA1蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第57-58页 |
| 5.2.5 DF-1细胞全蛋白的收集 | 第58页 |
| 5.2.6 GSTpull-down试验 | 第58-59页 |
| 5.2.7 差异蛋白质条带的质谱鉴定 | 第59页 |
| 5.3 结果 | 第59-62页 |
| 5.3.1 含GST-EtAMA1重组质粒的原核表达及鉴定 | 第59页 |
| 5.3.2 筛选差异蛋白SDS-PAGE分析、银染及质谱鉴定 | 第59-62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-63页 |
| 第六章 全文总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71-72页 |
