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猪腺病毒3型PCR检测方法的建立及Hexon基因克隆分析

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猪腺病毒3型PCR检测方法的建立及Hexon基因克隆分析
论文目录
 
中文摘要第1-6页
ABSTRACT第6-8页
常用缩略词表第8-13页
文献综述第13-21页
1 病原学第13-18页
  1.1 腺病毒的分类第13-14页
  1.2 PADV-3基因组结构及特点第14-15页
  1.3 PADV-3 Hexon和E区基因的结构功能第15-16页
  1.4 PADV-3生物学特性第16页
  1.5 PADV-3病原流行第16-17页
  1.6 疫苗载体应用第17-18页
2 检测方法研究应用第18-20页
  2.1 免疫电子显微镜第18-19页
  2.2 酶联免疫吸附试验第19页
  2.3 聚合酶链式反应第19-20页
3 前景展望第20页
4 研究的目的与意义第20-21页
第一章 猪腺病毒3型PCR检测方法的建立第21-42页
1 试验材料第21-23页
  1.1 阳性病料第21页
  1.2 临床样品的收集第21-22页
  1.3 主要试剂第22页
  1.4 主要仪器第22页
  1.5 溶液配制第22-23页
2 试验方法第23-30页
  2.1 PADV-3 PCR检测方法的建立第23-28页
    2.1.1 引物合成与设计第23页
    2.1.2 病毒DNA提取第23-24页
    2.1.3 目的片段PCR扩增第24页
    2.1.4 PCR产物的回收及纯化第24-25页
    2.1.5 感受态细胞的制备第25-26页
    2.1.6 连接转化第26页
    2.1.7 质粒的提取与鉴定第26-27页
    2.1.8 反应条件的优化第27页
    2.1.9 特异性试验第27页
    2.1.10 敏感性试验第27页
    2.1.11 重复性试验第27页
    2.1.12 PADV-3感染情况调查第27-28页
  2.2 PADV-3实时荧光定量PCR检测方法的建立第28-30页
    2.2.1 荧光定量PCR引物的设计第28页
    2.2.2 病毒核酸的提取第28页
    2.2.3 阳性标准品的制备第28-29页
    2.2.4 反应条件的优化第29页
    2.2.5 标准曲线的建立第29页
    2.2.6 特异性试验第29页
    2.2.7 实时荧光定量PCR和常规PCR敏感度第29页
    2.2.8 重复性及再现性评估第29-30页
    2.2.9 PADV-3感染组织特性研究第30页
3 结果第30-39页
  3.1 PADV-3 PCR检测方法建立结果第30-34页
    3.1.1 退火温度和引物浓度优化结果第30-31页
    3.1.2 目的片段克隆与序列分析第31页
    3.1.3 PCR的特异性试验结果第31-32页
    3.1.4 PCR敏感性试验结果第32页
    3.1.5 PCR重复性试验结果第32-33页
    3.1.6 PADV-3感染情况调查第33-34页
  3.2 PADV-3实时荧光定量PCR建立结果第34-39页
    3.2.1 优化实时荧光定量PCR检测条件第34页
    3.2.2 实时荧光定量PCR标准曲线的绘制第34-35页
    3.2.3 熔解曲线和特异性分析第35-36页
    3.2.4 PADV-3实时荧光定量PCR敏感性第36-37页
    3.2.5 重复性及再现性评估第37-38页
    3.2.6 PADV-3感染组织特性研究第38-39页
4 讨论第39-41页
  4.1 PCR的检测方法第39-40页
  4.2 实时荧光定量PCR的检测方法第40-41页
5 小结第41-42页
第二章 HEXON基因克隆分析第42-52页
1 试验材料第42页
  1.1 生物信息学软件第42页
2 试验方法第42-44页
  2.1 引物的设计与合成第42页
  2.2 PADV-3 Hexon全基因克隆与测序第42-43页
  2.3 Hexon蛋白基本理化性质分析第43页
  2.4 Hexon基因密码子的偏嗜性分析第43页
  2.5 抗原表位预测分析第43页
  2.6 Hexon蛋白疏水性分析第43页
  2.7 Hexon蛋白信号肽分析第43页
  2.8 Hexon蛋白磷酸化位点分析第43页
  2.9 遗传变异分析第43-44页
3 结果第44-49页
  3.1 Hexon基因克隆与鉴定第44-45页
  3.2 Hexon蛋白基本理化性质分析第45页
  3.3 Hexon基因密码子的偏嗜性分析第45页
  3.4 抗原表位预测分析第45-46页
  3.5 Hexon蛋白疏水性分析第46-47页
  3.6 Hexon蛋白信号肽分析第47-48页
  3.7 Hexon蛋白磷酸化位点分析第48页
  3.8 遗传变异分析第48-49页
4 讨论第49-51页
5 小结第51-52页
全文结论第52-53页
参考文献第53-57页
致谢第57-58页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第58页

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