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检测鸭坦布苏病毒血清抗体的胶体金免疫层析试纸条研制

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检测鸭坦布苏病毒血清抗体的胶体金免疫层析试纸条研制
论文目录
 
中文摘要第1-5页
ABSTRACT第5-7页
缩略词表第7-12页
第一部分 文献综述及选题背景第12-17页
1 鸭坦布苏病毒概述第12-13页
2 鸭坦布苏病的检测第13-14页
3 胶体金免疫层析技术第14-16页
  3.1 GICA原理简介第14-15页
  3.2 GICA在动物病毒检测方面的应用第15-16页
4 选题意义第16-17页
第二部分 试验研究第17-56页
第一章 鸭坦布苏病毒的纯化、形态学观察及其高免血清制备第18-24页
1 材料第18-19页
  1.1 毒株与动物第18页
  1.2 主要仪器第18页
  1.3 主要试剂第18页
  1.4 溶液配制第18-19页
2 方法第19-20页
  2.1 病毒增殖第19页
  2.2 病毒纯化第19页
    2.2.1 病毒浓缩第19页
    2.2.2 蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒第19页
  2.3 病毒形态学观察第19-20页
  2.4 病毒含量测定第20页
  2.5 鸭抗DTMUV免疫血清制备第20页
    2.5.1 免疫抗原的制备第20页
    2.5.2 免疫程序第20页
    2.5.3 效价测定第20页
3 结果第20-22页
  3.1 病毒纯化第20-21页
  3.2 病毒形态学观察第21页
  3.3 病毒含量测定第21-22页
  3.4 抗体效价测定第22页
4 讨论第22-23页
5 小结第23-24页
第二章 鸭坦布苏病毒截短E基因的克隆表达第24-36页
1 材料第24-26页
  1.1 毒株、菌株第24页
  1.2 主要仪器第24页
  1.3 主要试剂第24-25页
  1.4 溶液配制第25-26页
    1.4.1 琼脂糖凝胶电泳溶液第25页
    1.4.2 SDS-PAGE电泳溶液第25页
    1.4.3 Ni柱亲和层析溶液第25-26页
    1.4.4 免疫印迹溶液第26页
2 方法第26-31页
  2.1 引物设计第26页
  2.2 目的基因扩增第26-27页
    2.2.1 DTMUV总RNA提取第26页
    2.2.2 cDNA的合成第26页
    2.2.3 目的E基因的PCR扩增第26-27页
    2.2.4 PCR产物琼脂糖凝胶电泳第27页
    2.2.5 PCR产物回收纯化第27页
  2.3 目的E基因TA克隆第27-28页
    2.3.1 连接反应第27页
    2.3.2 大肠杆菌感受态细胞制备第27页
    2.3.3 连接产物的转化第27页
    2.3.4 重组质粒pGM-T-E抽提第27页
    2.3.5 重组质粒pGM-T-E酶切鉴定第27-28页
  2.4 原核表达重组质粒构建第28-29页
    2.4.1 双酶切与胶回收第28页
    2.4.2 连接反应第28页
    2.4.3 连接产物的转化第28页
    2.4.4 重组表达质粒pET-32a-E鉴定第28-29页
  2.5 重组表达质粒诱导表达第29-30页
    2.5.1 重组质粒pET-32a-E的转化第29页
    2.5.2 重组质粒pET-32a-E的诱导表达第29页
    2.5.3 SDS-PAGE电泳第29页
    2.5.4 表达条件优化第29-30页
  2.6 原核重组蛋白纯化第30页
    2.6.1 重组蛋白可溶性分析第30页
    2.6.2 重组蛋白的纯化第30页
    2.6.3 重组蛋白复性和浓缩第30页
  2.7 Western-blot分析第30-31页
3 结果第31-34页
  3.1 截短E基因PCR扩增第31页
  3.2 重组表达质粒构建第31-32页
  3.3 重组表达质粒诱导表达第32-33页
    3.3.1 pET-32a-E的诱导表达第32页
    3.3.2 pET-32a-E表达条件优化第32-33页
  3.4 重组蛋白纯化第33-34页
    3.4.1 可溶性分析第33页
    3.4.2 蛋白纯化第33-34页
  3.5 Western-blot分析第34页
4 讨论第34-35页
5 小结第35-36页
第三章 检测鸭坦布苏病毒血清抗体的胶体金免疫层析试纸条的研制与应用第36-56页
1 材料第36-37页
  1.1 血清第36页
  1.2 主要仪器第36页
  1.3 主要试剂和材料第36-37页
  1.4 主要溶液配制第37页
2 方法第37-42页
  2.1 玻璃器皿处理第37页
  2.2 胶体金溶液质量鉴定第37-38页
    2.2.1 肉眼观察第37页
    2.2.2 紫外扫描鉴定第37-38页
    2.2.3 胶体金稳定性鉴定第38页
  2.3 金标E蛋白制备第38-39页
    2.3.1 重组E蛋白预处理第38页
    2.3.2 胶体金溶液的准备第38页
    2.3.3 胶体金标记重组E蛋白最适pH值选择第38-39页
    2.3.4 胶体金标记E蛋白最适量的选择第39页
  2.4 金标羊抗鼠IgG制备第39页
  2.5 免疫胶体金鉴定和纯化第39-40页
    2.5.1 免疫胶体金鉴定第39-40页
    2.5.2 免疫胶体金的纯化第40页
  2.6 胶体金试纸条初步组装及鉴定第40页
  2.7 试纸条反应条件优化第40-41页
    2.7.1 试纸条组成材料选择第40-41页
    2.7.2 金标复合物稀释液和稀释倍数选择第41页
    2.7.3 检测线和质控线包被浓度优化第41页
  2.8 免疫层析试纸条性能测定第41-42页
    2.8.1 特异性试验第41页
    2.8.2 敏感性试验第41-42页
    2.8.3 重复性试验第42页
    2.8.4 对比试验第42页
    2.8.5 稳定性试验第42页
3 结果第42-53页
  3.1 胶体金溶液质量鉴定第42-43页
  3.2 金标E蛋白制备第43-45页
    3.2.1 金标E蛋白最适标记pH选择第43-44页
    3.2.2 金标E蛋白最适蛋白标记量选择第44-45页
  3.3 金标羊抗鼠IgG制备第45-46页
    3.3.1 金标羊抗鼠IgG最适标记pH选择第45页
    3.3.2 金标羊抗鼠IgG最适抗体标记量选择第45-46页
  3.4 免疫胶体金的鉴定第46页
  3.5 试纸条初步组装及鉴定第46-47页
  3.6 试纸条反应条件的优化第47-51页
    3.6.1 层析膜的选择第47-48页
    3.6.2 金标垫的选择第48-49页
    3.6.3 样品垫的选择第49页
    3.6.4 吸收垫的选择第49页
    3.6.5 金标复合物稀释液和稀释倍数的选择第49-50页
    3.6.6 检测线和质控线包被浓度优化第50-51页
  3.7 免疫层析试纸条的性能测定第51-53页
    3.7.1 特异性试验第51页
    3.7.2 敏感性试验第51页
    3.7.3 重复性试验第51-52页
    3.7.4 对比试验第52页
    3.7.5 稳定性试验第52-53页
4 讨论第53-54页
5 小结第54-56页
结论第56-57页
参考文献第57-65页
致谢第65-66页
个人简历及完成的学术论文目录第66页

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