牛病毒性腹泻病毒E0基因的表达及间接ELISA检测方法的建立

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牛病毒性腹泻病毒E0基因的表达及间接ELISA检测方法的建立

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牛病毒性腹泻病毒E0基因的表达及间接ELISA检测方法的建立

论文目录
摘要	第1-5页
Abstract	第5-9页
第1章前言	第9-22页
· BVDV简介	第9页
· BVDV生物学特性	第9-12页
· BVDV的理化性质	第10页
· BVDV的分型	第10-11页
· BVDV的结构蛋白研究进展	第11-12页
· BVDV流行病学研究进展及持续性感染	第12-15页
· 国外BVD流行现况	第13-14页
· 国内BVD流行现况	第14-15页
· 持续性感染	第15页
· BVDV检测方法研究进展	第15-19页
· 病毒分离	第16页
· 电镜技术	第16-17页
· 琼脂扩散试验	第17页
· 病毒中和试验	第17页
· 酶联免疫吸附试验	第17-18页
· 免疫荧光技术	第18页
· 反转录-多聚链式反应(RT-PCR)技术	第18-19页
· BVD的防治	第19-20页
· 研究目的和意义	第20-22页
第2章 BVDV-E0基因原核表达载体的构建及表达	第22-40页
· 实验材料	第22-24页
· 细胞、病毒株、质粒及菌种	第22页
· 血清及抗体	第22页
· 主要试剂	第22-23页
· 主要仪器	第23页
· 引物	第23-24页
· 实验方法	第24-33页
· 牛肾细胞的制备及BVDV-C_(24)V的增殖	第24页
· BVDV-E0基因的克隆及序列分析	第24-29页
· BVDV-E0基因原核表达载体的构建	第29-30页
· 阳性重组质粒pET-28a-E0的表达与纯化	第30-33页
· 实验结果	第33-38页
· 细胞培养及C_(24)V毒株增殖结果	第33-34页
· BVDV-E0基因RT-PCR的结果	第34页
· 重组质粒pMD18-T-E0的鉴定与测序结果分析	第34-35页
· pET-28a-E0原核表达载体的鉴定	第35页
· 重组质粒pET-28a-E0表达产物的SDS-PAGE	第35-36页
· 目的蛋白的纯化	第36-38页
2.3.7 目的蛋白的Western blot	第38页
· 讨论	第38-40页
· 细胞培养与病毒增殖	第38-39页
· RNA的提取	第39-40页
第3章间接ELISA方法的建立	第40-51页
· 间接ELISA反应条件的优化	第40-41页
· 抗原包被最佳浓度与血清最佳稀释度的选择	第40页
· 最佳封闭液及封闭时间的确定	第40-41页
· 血清最适作用时间的测定	第41页
· 酶标二抗最佳工作浓度及工作时间的测定	第41页
· 底物工作时间的测定	第41页
· 阴阳性临界值的确定	第41-42页
· 敏感性试验	第42页
· 特异性试验	第42页
· 重复性试验	第42-43页
· 批内重复	第42页
· 批间重复	第42-43页
· 与商品化试剂盒的比较试验	第43页
· 实验结果	第43-49页
· 抗原包被最佳浓度与血清最佳稀释度的确定	第43-44页
· 最佳封闭液及封闭时间的确定	第44-45页
· 血清最适作用时间的确定	第45页
· 酶标二抗最佳工作浓度及工作时间的测定	第45页
· 底物工作时间的测定	第45-46页
· 阴阳性临界值的确定	第46页
· 特异性试验	第46-47页
· 敏感性试验	第47页
· 重复性试验	第47-49页
· 与商品化试剂盒的比较试验	第49页
· 讨论	第49-51页
第4章结论	第51-52页
参考文献	第52-58页
致谢	第58-59页
作者简介	第59 页

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