论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-25页 |
| 1.1 油菜菌核病抗性研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1.1 油菜菌核病简介 | 第15-16页 |
| 1.1.2 油菜菌核病症状 | 第16页 |
| 1.1.3 油菜菌核病侵染循环 | 第16-17页 |
| 1.1.4 油菜菌核病致病机理研究进展 | 第17-19页 |
| 1.1.5 油菜菌核病的防治策略 | 第19-20页 |
| 1.2 菌核病抗性与开花期的关系 | 第20页 |
| 1.3 AtRDR研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 LTP家族及LTP1基因研究进展 | 第21-22页 |
| 1.5 PDF家族及PDF2.2基因研究进展 | 第22-23页 |
| 1.6 研究基础及目的意义 | 第23-25页 |
| 第2章 AtRDR基因的抗病功能研究 | 第25-34页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 引物 | 第25-26页 |
| 2.1.3 常用培养基 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 AtRDR介导的拟南芥对菌核病的抗性鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 培养核盘菌菌核 | 第26页 |
| 2.2.1.2 菌核病活体叶接种 | 第26-27页 |
| 2.2.2 抗病性相关基因表达分析 | 第27-28页 |
| 2.2.2.1 拟南芥RNA提取 | 第27页 |
| 2.2.2.2 RNA反转录为cDNA | 第27页 |
| 2.2.2.3 荧光定量PCR反应 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.3.1 AtRDR基因生物信息分析 | 第28-29页 |
| 2.3.1.1 AtRDR序列分析 | 第28-29页 |
| 2.3.1.2 AtRDR剪接体理化性质分析 | 第29页 |
| 2.3.1.3 AtRDR基因启动子区域分析 | 第29页 |
| 2.3.2 AtRDR介导的拟南芥对菌核病的抗性 | 第29-30页 |
| 2.3.3 AtRDR调节病害防御基因表达 | 第30-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 第3章 AtRDR互作蛋白研究 | 第34-47页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第34-37页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第34-35页 |
| 3.1.2.1 本研究用到的菌种 | 第34页 |
| 3.1.2.2 本研究用到的质粒 | 第34-35页 |
| 3.1.3 引物 | 第35页 |
| 3.1.4 分析软件 | 第35页 |
| 3.1.5 实验试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.6 主要仪器设备 | 第36页 |
| 3.1.7 常用培养基及溶液 | 第36-37页 |
| 3.2 方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 酵母双杂实验 | 第37-39页 |
| 3.2.1.1 酵母表达载体的构建 | 第37页 |
| 3.2.1.2 酵母感受态的制备及质粒转化 | 第37-38页 |
| 3.2.1.3 诱饵质粒自激活检测 | 第38页 |
| 3.2.1.4 酵母双杂文库筛选 | 第38-39页 |
| 3.2.1.5 诱饵蛋白与猎物蛋白相互作用的验证 | 第39页 |
| 3.3 | 第39-42页 |
| 3.3.1 BiFC表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 3.3.1.1 提取拟南芥总RNA | 第39页 |
| 3.3.1.2 合成cDNA链 | 第39页 |
| 3.3.1.3 构建TOPO入门载体 | 第39-41页 |
| 3.3.1.4 构建烟草BIFC载体 | 第41页 |
| 3.3.2 烟草BIFC实验方法 | 第41-42页 |
| 3.3.3 AtRDR对AtLTP1和AtPDF2.2表达的影响 | 第42页 |
| 3.3.3.1 培养核盘菌菌核 | 第42页 |
| 3.3.3.2 菌核病活体叶接种 | 第42页 |
| 3.3.3.3 荧光定量实验 | 第42页 |
| 3.4 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.4.1 AtRDR 与 AtLTP1, AtPDF2.2互作 | 第42-44页 |
| 3.4.2 AtRDR过表达和突变对AtLP1和AtPDF2.2表达的影响 | 第44-46页 |
| 3.5 讨论 | 第46-47页 |
| 第4章 LTP1和PDF2.2基因家簇分析 | 第47-62页 |
| 4.1 材料 | 第47页 |
| 4.2 方法 | 第47-48页 |
| 4.2.1 LTP及PDF进化分析 | 第47-48页 |
| 4.2.2 LTP家族成员和PDF家族成员的共线性分析 | 第48页 |
| 4.2.3 LTP家族成员和PDF家族成员蛋白质特性分析 | 第48页 |
| 4.2.4 LTP家族成员及PDF家族成员启动子区域分析 | 第48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-60页 |
| 4.3.1 LTP及PDF家族成员系统发育分析 | 第48-52页 |
| 4.3.2 LTP家族成员和PDF家族成员共线性分析 | 第52-53页 |
| 4.3.3 LTP家族成员及PDF家族成员蛋白质特性分析 | 第53-56页 |
| 4.3.4 LTP家族成员及PDF家族成员启动子区域分析 | 第56-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第5章 AtLTP1和AtPDF2.2基因的克隆和转基因功能研究 | 第62-72页 |
| 5.1 材料和仪器 | 第62-64页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第62页 |
| 5.1.2 菌株和质粒 | 第62-63页 |
| 5.1.3 引物 | 第63页 |
| 5.1.4 实验试剂 | 第63-64页 |
| 5.1.5 主要仪器设备 | 第64页 |
| 5.2 方法 | 第64-68页 |
| 5.2.1 过表达及干扰研究 | 第64-66页 |
| 5.2.1.1 超表达载体构建 | 第64-65页 |
| 5.2.1.2 RNAi干扰载体构建 | 第65-66页 |
| 5.2.2 拟南芥转化和阳性苗筛选 | 第66-67页 |
| 5.2.2.1 农杆菌感受态制备 | 第66页 |
| 5.2.2.2 转化农杆菌感受态 | 第66页 |
| 5.2.2.3 花絮浸染法转化拟南芥 | 第66-67页 |
| 5.2.2.4 转基因阳性苗筛选鉴定 | 第67页 |
| 5.2.3 拟南芥杂交试验 | 第67页 |
| 5.2.4 农杆菌介导的油菜转化 | 第67-68页 |
| 5.3 结果 | 第68-71页 |
| 5.3.1 基因克隆 | 第68页 |
| 5.3.2 转基因拟南芥的获得 | 第68-70页 |
| 5.3.3 双突变体材料的获得 | 第70页 |
| 5.3.4 转基因油菜材料获得 | 第70-71页 |
| 5.3.4.1 转基因植株的获得 | 第70页 |
| 5.3.4.2 转基因油菜分子鉴定 | 第70-71页 |
| 5.4 讨论 | 第71-72页 |
| 第6章 结论与展望 | 第72-75页 |
| 6.1 全文结论与创新点 | 第72页 |
| 6.1.1 全文结论 | 第72页 |
| 6.1.2 创新点 | 第72页 |
| 6.2 思考与展望 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
