地衣芽孢杆菌来源β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆、改造及其表达 |
论文目录 | | 摘要 | 第1-8
页 | Abstract | 第8-12
页 | 第一章 引言 | 第12-29
页 | · β-葡聚糖概述 | 第12
页 | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶 | 第12-17
页 | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶分布 | 第12-13
页 | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶结构与性质 | 第13-15
页 | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶功能及应用 | 第15
页 | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆及表达研究 | 第15-17
页 | · 原核表达系统——pET系统 | 第17-18
页 | · pET系统概述 | 第17
页 | · pET载体 | 第17-18
页 | · pET宿主菌 | 第18
页 | · 巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris(简写P.pastoris)表达系统 | 第18-25
页 | · 巴斯德毕赤酵母表达系统的优势特点 | 第18-19
页 | · 表达载体 | 第19-22
页 | · 翻译后修饰及加工 | 第22-23
页 | · P.pastoris发酵条件研究 | 第23-24
页 | · P.pastoris发酵策略研究 | 第24-25
页 | · 外源基因自身的改造方法 | 第25-26
页 | · 存在问题及实验方案 | 第26-28
页 | · 本研究目的及意义 | 第28-29
页 | 第二章 天然菌株地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis EGW039产酶研究 | 第29-33
页 | · 材料 | 第29
页 | · 方法 | 第29-30
页 | · 产酶培养基的优化 | 第29
页 | · 发酵条件的优化 | 第29-30
页 | · 酶活测定 | 第30
页 | · 结果与分析 | 第30-32
页 | · 不同碳氮源的影响 | 第30-31
页 | · 发酵条件的优化 | 第31-32
页 | · 讨论 | 第32-33
页 | 第三章 原核表达:地衣芽孢杆菌B.licheniformis EGW039来源β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆及其在E.coli BL21(DE3)中表达 | 第33-53
页 | · 材料 | 第33-35
页 | · 方法 | 第35-40
页 | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆与重组载体的构建 | 第35-38
页 | · 重组大肠杆菌的构建 | 第38-39
页 | · 重组酶的诱导表达与SDS-PAGE | 第39
页 | · 重组酶的纯化 | 第39-40
页 | · 重组酶的酶学性质 | 第40
页 | · 结果与分析 | 第40-51
页 | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆 | 第40-41
页 | · β-1,3-1,4-葡聚糖酶的序列分析和高级结构模拟 | 第41-44
页 | · 重组表达载体的构建 | 第44-47
页 | · 重组酶的SDS-PAGE | 第47
页 | · 重组酶的纯化 | 第47-48
页 | · 重组酶的酶学性质 | 第48-51
页 | · 讨论 | 第51-53
页 | · 表达水平研究 | 第51
页 | · 表达系统研究 | 第51-52
页 | · 酶学性质研究 | 第52-53
页 | 第四章 真核表达:β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因改造及其在P.pastoris GS115中表达 | 第53-78
页 | · 材料 | 第53-54
页 | · 方法 | 第54-60
页 | · B.licheniformis EGW039来源β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因改造 | 第54-55
页 | · 重组载体的构建 | 第55-56
页 | · 重组酵母的构建 | 第56-57
页 | · 重组酵母的产酶发酵 | 第57-58
页 | · 发酵参数的检测 | 第58-59
页 | · 重组酶的酶学性质 | 第59
页 | · 酶解产物分析 | 第59-60
页 | · 结果与分析 | 第60-72
页 | · 密码子优化β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列分析 | 第60-61
页 | · 重组表达载体的构建及验证 | 第61-63
页 | · 重组酵母的构建 | 第63
页 | · 重组酵母的产酶发酵 | 第63-68
页 | · 重组酶的酶学性质 | 第68-72
页 | · 讨论 | 第72-78
页 | · 密码子优化 | 第73
页 | · 表达载体、宿主菌株的优化选择 | 第73
页 | · 重组酵母发酵罐水平上的条件优化 | 第73-74
页 | · P.pastoris GS115/pPIC9K-M-eg1314高密度发酵的优势 | 第74-75
页 | · 基因重组与表达策略研究 | 第75-76
页 | · 提高表达产物稳定性的研究 | 第76-78
页 | 第五章 结论与展望 | 第78-80
页 | · 主要研究结果如下 | 第78-79
页 | · 展望 | 第79-80
页 | 参考文献 | 第80-86
页 | 致谢 | 第86-87
页 | 作者简历 | 第87页 |
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