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重组人胰岛素原在毕赤酵母中的表达及分离纯化的研究
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重组人胰岛素原在毕赤酵母中的表达及分离纯化的研究
论文目录
 
第一章 绪论第16-36 页
　　· 生物技术与生物技术药物第16-17 页
　　· 糖尿病现状及其治疗药物第17-18 页
　　· 胰岛素及其临床作用简介第18-19 页
　　· 胰岛素药物的研究历程及现状第19-21 页
　　· 重组人胰岛素的研究第21-26 页
　　　　· 人胰岛素原在大肠杆菌中的表达第22-25 页
　　　　· 人胰岛素原在酵母中的表达第25-26 页
　　· 巴斯德毕赤酵母表达系统第26-30 页
　　　　· 巴斯德毕赤酵母表达系统的优点第27 页
　　　　· 宿主菌第27-28 页
　　　　· 表达载体第28-29 页
　　　　· 转化方法第29 页
　　　　· 外源蛋白的表达第29-30 页
　　· 巴斯德毕赤酵母发酵条件的研究第30-33 页
　　　　· 培养基第31 页
　　　　· 温度第31-32 页
　　　　· pH值第32 页
　　　　· 溶解氧第32-33 页
　　　　· 甲醇的流加第33 页
　　· 重组蛋白质的分离纯化第33-35 页
　　　　· 重组蛋白分离纯化的特点与方法第33-34 页
　　　　· 重组蛋白分离纯化的策略第34-35 页
　　· 课题的目的和意义第35-36 页
第二章 基因工程菌表达重组蛋白的鉴定第36-43 页
　　· 试验材料第36-37 页
　　　　· 菌种第36 页
　　　　· 试剂第36-37 页
　　　　· 实验主要仪器第37 页
　　· 试验方法第37-40 页
　　　　· 基因工程菌重悬培养第37 页
　　　　· SDS-PAGE凝胶电泳第37-39 页
　　　　· 蛋白的免疫印迹(Western blot)第39-40 页
　　· 结果与讨论第40-42 页
　　　　· 基因工程菌的表达模式第40 页
　　　　· 表达产物的免疫检测第40-42 页
　　· 本章结论第42-43 页
第三章 基因工程菌发醉条件的研究第43-64 页
　　· 试验材料第43-44 页
　　　　· 菌种第43 页
　　　　· 试剂第43 页
　　　　· 实验主要仪器第43-44 页
　　· 试验方法第44-46 页
　　　　· 摇瓶培养第44-45 页
　　　　· 发酵罐发酵第45 页
　　　　· 分析方法第45-46 页
　　· 结果与讨论第46-62 页
　　　　· 基因工程菌细胞光密度与细胞质量浓度的关系第47 页
　　　　· 基因工程菌生长模型的建立以及发酵动力学参数的推导第47-50 页
　　　　· 基因工程菌发酵条件的优化第50-53 页
　　　　· 基础盐培养基配方的优化第53-57 页
　　　　· 基因工程菌诱导阶段的诱导策略第57-61 页
　　　　· 基因工程菌的发酵罐培养第61-62 页
　　· 本章结论第62-64 页
第四章 重组人胰岛素原的分离纯化第64-78 页
　　· 试验材料第64-65 页
　　　　· 试剂第64-65 页
　　　　· 实验主要仪器第65 页
　　· 试验方法第65-67 页
　　　　· 中空纤维膜超滤第65-66 页
　　　　· 离子交换层析第66 页
　　　　· 固定化金属离子亲和层析第66-67 页
　　　　· 凝胶层析第67 页
　　　　· 酶切试验第67 页
　　· 结果与讨论第67-77 页
　　　　· 重组人胰岛素原分离步骤的设想第67-68 页
　　　　· 发酵上清液过中空纤维膜柱脱盐浓缩试验第68-69 页
　　　　· 目的蛋白的分离试验第69-75 页
　　　　· Sephadex G-50凝胶层析第75-76 页
　　　　· 酶切试验结果第76-77 页
　　　　· 胰岛素活性的测定第77 页
　　· 本章结论第77-78 页
第五章 结论与建议第78-81 页
参考文献第81-86 页
附录一 培养基第86-88 页
附录二 电泳液第88-90 页
附录三 免疫印迹缓冲液第90-91 页
附录四 标准曲线绘制第91-92 页
附录五 发酵参数的计算方法第92-93 页
致谢第93-94 页
攻读学位期间发表的学术论文目录第94页

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