论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9
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| ABSTRACT | 第9-11
页 |
| 第一章 综述 | 第11-33
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| · 青霉素G酰化酶 | 第11-13
页 |
| · 青霉素G酰化酶在β－内酰胺类抗生素生物催化合成中的作用 | 第13-17
页 |
| · 1985年以前半合成β－内酰胺类抗生素工业生产 | 第13-14
页 |
| · β－内酰胺类母核的生物催化合成 | 第14-16
页 |
| · 酶促侧链与β－内酰胺类母核的耦合 | 第16-17
页 |
| · 青霉素G酰化酶的水解与合成特性 | 第17-20
页 |
| · 固定化金属亲和层析 | 第20-24
页 |
| · 基本原理和步骤 | 第20-22
页 |
| · 基质 | 第22
页 |
| · 配位基 | 第22-23
页 |
| · 洗脱 | 第23-24
页 |
| · 蛋白质工程 | 第24-28
页 |
| · 有理设计 | 第24-25
页 |
| · 定向进化 | 第25-26
页 |
| · 获得定向进化多样性新方法之一——DNA混组技术 | 第26-28
页 |
| · 本研究的内容与目的 | 第28
页 |
| 参考文献 | 第28-33
页 |
| 第二章 四种野生型青霉素G酰化酶的克隆、表达、纯化与合成／水解比测定 | 第33-43
页 |
| · 引言 | 第33
页 |
| · 材料和方法 | 第33-37
页 |
| · 仪器 | 第33-34
页 |
| · 质粒与菌种 | 第34
页 |
| · 培养基 | 第34
页 |
| · 酶和试剂 | 第34
页 |
| · 构建HisTag融合表达系统 | 第34-35
页 |
| · 发酵与表达 | 第35
页 |
| · 纯化 | 第35-36
页 |
| · 青霉素G酰化酶活性测定(NIPAB法) | 第36
页 |
| · PGA合成水解比(S／H)的测定 | 第36-37
页 |
| · 结果与讨论 | 第37-40
页 |
| · 表达载体的构建 | 第37
页 |
| · 表达条件优化 | 第37-39
页 |
| · Co~(2+)-IDA agar亲和载体纯化效率 | 第39
页 |
| · 四种重组PGA的S／H值 | 第39-40
页 |
| · 结论 | 第40
页 |
| 参考文献 | 第40-43
页 |
| 第三章 青霉素G酰化酶DNA家族混组α亚基嵌合体库的建立及筛选 | 第43-60
页 |
| · 引言 | 第43
页 |
| · 材料和方法 | 第43-47
页 |
| · 菌株和质粒 | 第43
页 |
| · 培养基 | 第43-44
页 |
| · 酶和化学试剂 | 第44
页 |
| · 引物设计与分子克隆 | 第44-45
页 |
| · DNA家族混组中骨架基因的设计 | 第45
页 |
| · 五种PGA基因DNA家族混组 | 第45
页 |
| · 抑菌圈法筛选嵌合体克隆 | 第45-46
页 |
| · 重组克隆的小量发酵 | 第46
页 |
| · HPLC高通量筛选重组克隆 | 第46-47
页 |
| · 大肠杆菌周质空间蛋白的小量快速抽提 | 第47
页 |
| · PGA的活力测定(NIPAB法) | 第47
页 |
| · PGA合成水解比(S/H)的测定 | 第47
页 |
| · 结果与讨论 | 第47-58
页 |
| · 多种PGA氨基酸序列联配和系统发育分析 | 第47-54
页 |
| · DNA家族混组改造PGAα亚基 | 第54-55
页 |
| · PGA基因嵌合库的抑菌圈法筛选 | 第55-56
页 |
| · HPLC高通量筛选重组克隆效果 | 第56-58
页 |
| · 结语 | 第58
页 |
| 参考文献 | 第58-60
页 |
| 论文及专利 | 第60-61
页 |
| 已发表论文 | 第60
页 |
| 已申请专利 | 第60-61
页 |
| 致谢 | 第61
页 |
