论文目录 | |
| 第一章 综述 | 第10-24
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| · TAT-PTD的研究概况 | 第10-19
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| · 背景介绍 | 第10-11
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| · TAT-PTD的发现 | 第11-12
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| · TAT-PTD的跨膜递送机制的研究 | 第12-15
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| · TAT-PTD的应用 | 第15-18
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| · 小分子的递送 | 第15-16
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| · 肽的递送 | 第16
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| · 蛋白的递送 | 第16-17
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| · 反义递送 | 第17-18
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| · 体内递送 | 第18
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| · 颗粒递送 | 第18
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| · TAT-PTD的应用前景 | 第18-19
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| · 绿色荧光蛋白(green fluorescent ptotein，GFP) | 第19-22
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| · GFP的来源、结构和性质 | 第19-21
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| · GFP与其它传统标记物的比较 | 第21
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| · GFP标记的检测方法 | 第21
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| · GFP的应用 | 第21-22
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| · 本研究课题的来源、研究目的和主要研究内容 | 第22-24
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| 第二章 材料与方法 | 第24-50
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| · 实验流程 | 第24-25
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| · 实验试剂和材料 | 第25-28
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| · 质粒、菌株、细胞株和动物 | 第25
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| · 主要药品和试剂 | 第25-26
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| · 色谱材料 | 第26
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| · 培养基 | 第26
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| · 常用溶液及缓冲液 | 第26-28
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| · 主要使用仪器 | 第28
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| · 重组质粒GST-TAT-GFP的构建 | 第28-34
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| · 目的基因TAT-GFP的扩增 | 第28-30
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| · 引物的设计与合成 | 第28-29
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| · 引物溶解 | 第29
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| · PCR扩增体系 | 第29-30
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| · 目的基因片断TAT-GFP的回收与纯化 | 第30
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| · pUCm-TAT-GFP质粒载体的构建 | 第30-33
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| · 目的基因片断TAT-GFP与pUCm-T Vector的连接 | 第30
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| · pUCm-TAT-GFP质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第30-31
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| · 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第30-31
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| · 转化 | 第31
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| · 含pUCm-TAT-GFP质粒阳性克隆的筛选 | 第31-32
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| · pUCm-TAT-GFP质粒的酶切 | 第32
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| · 酶切后目的基因片断TAT-GFP的回收和纯化 | 第32
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| · PCR鉴定 | 第32-33
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| · pGEX-TAT-GFP的质粒载体的构建 | 第33-34
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| · 目的基因TAT-GFP与质粒pGEX-2T连接 | 第33
页 |
| · 转化和重组子的筛选 | 第33-34
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| · 大肠杆菌BL21感受态细胞的制备 | 第33
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| · 转化 | 第33
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| · 重组子的鉴定 | 第33-34
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| · 融合蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第34-42
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| · 蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第34-37
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| · 原理 | 第34-35
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| · 溶液的配制 | 第35-36
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| · 实验步骤 | 第36-37
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP与GST-GFP的表达对照 | 第37-38
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| · GST-TAT-GFP融合蛋白高表达克隆的筛选 | 第38
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP与GST-GFP表达条件的选择 | 第38-39
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| · 诱导温度的选择 | 第38
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| · 诱导时间的选择 | 第38-39
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| · 融合蛋白的大量表达、纯化及SDS-PAGE分析 | 第39-40
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP与GST-GFP纯化的原理 | 第39
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| · 实验步骤 | 第39-40
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| · 融合蛋白的定量(Folin酚法) | 第40
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| · 试剂 | 第40
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| · 标准曲线的绘制 | 第40
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| · 样品测定 | 第40
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| · 融合蛋白的Western blotting鉴定 | 第40-42
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| · 材料与试剂 | 第40-41
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| · 实验步骤 | 第41-42
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP和GST-GFP的荧光学特性研究 | 第42
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| · 两种重组菌上清液、清洗液与菌体裂解液成分的比较 | 第42
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送作用的研究 | 第42-50
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| · 细胞培养、样品处理、实验结果观察与测定 | 第42-44
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| · 细胞和细胞培养 | 第42-43
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| · 样品处理 | 第43
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| · 实验结果观察与测定方法 | 第43-44
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| · 荧光显微镜观察 | 第43
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| · 荧光分光光度计定量 | 第43-44
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送机制的研究 | 第44-45
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| · 细胞种类对GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第44
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| · 荧光显微镜观察 | 第44
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| · 荧光分光光度计定量 | 第44
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送的动力学研究 | 第44-45
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| · 时间的影响 | 第44
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| · 浓度的影响 | 第44
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| · 温度对融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第44-45
页 |
| · 荧光显微镜观察 | 第44
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| · 荧光分光光度计定量 | 第44-45
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| · 细胞代谢作用对GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第45
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| · 硫酸乙酰肝素对融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第45
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| · 荧光显微镜观察 | 第45
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| · 荧光分光光度计定量 | 第45
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP对细胞的毒性研究 | 第45-48
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| · 融合蛋白对细胞膜完整性的影响 | 第45-47
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| · 原理 | 第45
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| · 试剂 | 第45-46
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| · 标准曲线的绘制 | 第46
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| · 实验步骤 | 第46-47
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送对细胞的毒性测定 | 第47-48
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| · 试剂 | 第47
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| · 实验步骤 | 第47-48
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| · GST-TAT-GFP跨膜递送作用在动物体中的应用 | 第48-50
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| · 腹腔注射 | 第48
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| · 皮肤涂抹 | 第48-50
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| · 实验分组 | 第48
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| · 涂抹方法 | 第48-49
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| · 取材与制片 | 第49-50
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| 第三章 结果与讨论 | 第50-80
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| · 重组质粒pGEX-TAT-GFP的构建 | 第50-54
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| · 目的基因TAT-GFP的扩增 | 第50
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| · 质粒载体pGEX-2T和目的基因片断TAT-GFP的回收 | 第50-51
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| · 含pUCm-TAT-GFP质粒阳性克隆的筛选 | 第51-53
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| · 重组质粒pGEX-TAT-GFP的构建 | 第53-54
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| · GST-TAT-GFP与GST-GFP的表达、纯化及其鉴定 | 第54-63
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP与GST-GFP的表达对照 | 第54-55
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP高表达克隆的筛选 | 第55-56
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP与GST-GFP表达条件的确定 | 第56-59
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| · 诱导温度的选择 | 第56-57
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| · 诱导时间的选择 | 第57-59
页 |
| · 融合蛋白的大量表达、纯化及SDS-PAGE分析 | 第59-60
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| · 融合蛋白的表达量测定 | 第60
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| · 融合蛋白的Western blotting鉴定 | 第60-61
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| · 融合蛋白荧光学特性的研究 | 第61-62
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| · 两种重组菌上清液、清洗液与菌体裂解液成分的比较 | 第62-63
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送作用的研究 | 第63-80
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送机制的研究 | 第63-74
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| · 细胞种类对GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第63-65
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| · 融合蛋白跨膜GST-TAT-GFP跨膜递送的动力学特性 | 第65-69
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| · 时间对融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第65-67
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| · 浓度对融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第67-68
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| · 温度对GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第68-69
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| · 细胞代谢作用对GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第69-71
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| · 硫酸乙酰肝素对GST-TAT-GFP跨膜递送的影响 | 第71-74
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP的毒性研究 | 第74-76
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP对细胞膜完整性的影响 | 第74-75
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP对细胞的毒性研究 | 第75-76
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP跨膜递送的应用 | 第76-80
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP在小白鼠体内组织的跨膜递送 | 第76-78
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| · 融合蛋白GST-TAT-GFP在小白鼠皮肤的跨膜递送 | 第78-80
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| 结论 | 第80-81
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| 致谢 | 第81-82
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| 参考文献 | 第82-91
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| 附录:TAT-GFP 测序结果 | 第91-93
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| 个人简历、在学期间的研究成果及发表的学术论文 | 第93页 |
