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赤霉菌致病基因RNAi片段转化小麦的研究

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赤霉菌致病基因RNAi片段转化小麦的研究
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-11页
缩略语表第11-12页
1 前言第12-23页
  1.1 研究背景第12-13页
  1.2 小麦遗传转化方法第13-17页
    1.2.1 基因枪法第13-14页
    1.2.2 影响基因枪转化的因素第14-15页
    1.2.3 农杆菌介导法第15-17页
  1.3 筛选标记基因第17-19页
    1.3.1 草丁膦N-乙酰转移酶基因(Bar)在小麦遗传转化中的应用第17-18页
    1.3.2 磷酸甘露糖异构酶基因(Pmi)及其在小麦遗传转化中的应用第18-19页
  1.4 赤霉病抗性相关基因的研究第19-20页
  1.5 RNA干扰技术在小麦抗赤霉病育种中的应用第20-22页
    1.5.1 RNA干扰技术的发展及其作用机制第20-21页
    1.5.2 本研究RNAi表达载体中涉及的基因第21-22页
  1.6 研究目的与意义第22-23页
2 实验材料与方法第23-34页
  2.1 实验材料第23-26页
    2.1.1 质粒及菌株第23页
    2.1.2 菌株扩大培养所用培养基第23页
    2.1.3 质粒DNA提取试剂第23页
    2.1.4 试剂盒和限制性内切酶第23-24页
    2.1.5 转化受体第24页
    2.1.6 小麦基因组DNA和RNA提取试剂第24页
    2.1.7 PCR及RT-PCR试剂第24页
    2.1.8 赤霉病菌接种和鉴定相关培养基配制第24-25页
    2.1.9 引物第25-26页
  2.2 实验方法第26-34页
    2.2.1 最小表达框的制备第26-28页
    2.2.2 转化受体的前处理第28-29页
    2.2.3 基因枪轰击第29-30页
    2.2.4 愈伤组织的后期培养第30页
    2.2.5 小麦叶片基因组DNA的粗提取第30-31页
    2.2.6 转基因小麦的PCR鉴定第31页
    2.2.7 转基因小麦的RT-PCR鉴定第31-32页
    2.2.8 加代种子的萌发与春化第32-33页
    2.2.9 赤霉病抗性鉴定第33-34页
3 实验结果与分析第34-56页
  3.1 最小表达框的制备第34-35页
  3.2 Pmi/甘露糖筛选体系下小麦幼胚的基因枪转化第35-56页
    3.2.1 小麦幼胚转化和转基因植株的获得第35-36页
    3.2.2 扬麦158转Lem2-pkcAs3-chs7As4、Ubi-chs7As3-chs7As4基因小麦的鉴定第36-41页
    3.2.3 襄麦76转pkcAs3-chs7As4基因小麦的鉴定第41-44页
    3.2.4 襄麦76转chs3bAs5As1、glsAs6-chs3bAs1、CYP51BAC-DNOS基因小麦的PCR鉴定第44-45页
    3.2.5 襄麦76转Dubi-ubi-gls3-gls6、Dubi-ubi-gls2-gls6基因小麦的PCR鉴定第45-46页
    3.2.6 襄麦76转CYP51BAC-DNOS、chs3bAs5As1、chs3bAs2As3基因小麦的PCR鉴定第46-48页
    3.2.7 襄麦76转gls3-gls6、chs3bAs5As1、chs3bAs2As3基因小麦的PCR鉴定第48-49页
    3.2.8 襄麦76转glsAs6-chs3bAs1、chs3bAs5As1、chs3bAs2As3基因小麦的PCR鉴定第49-51页
    3.2.9 襄麦76转Ubi-blf、Lem2-hvchi、Bar基因小麦的PCR鉴定第51-53页
    3.2.10 襄麦76转Ubi-blf、Lem2-hvchi、Pmi基因小麦的鉴定第53-54页
    3.2.11 襄麦76转基因植株田间单花接种鉴定第54-56页
4 讨论第56-59页
  4.1 影响小麦基因枪转化的因素第56-57页
  4.2 基因枪介导的最小表达框法转化小麦的遗传规律第57页
  4.3 转RNAi片段小麦的抗赤霉病性鉴定分析第57-59页
参考文献第59-67页
致谢第67页

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