论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 1 前言 | 第15-26页 |
| 1.1 鹅细小病毒生物学特征 | 第15-18页 |
| 1.1.1 分类学地位及形态学特征 | 第15页 |
| 1.1.2 分子生物学特性 | 第15-17页 |
| 1.1.3 理化性质 | 第17页 |
| 1.1.4 培养特性 | 第17-18页 |
| 1.2 鹅细小病毒流行病学的研究 | 第18-19页 |
| 1.2.1 传染来源和传播途径 | 第18页 |
| 1.2.2 易感宿主 | 第18-19页 |
| 1.2.3 流行特征 | 第19页 |
| 1.3 鹅细小病毒感染致病机理 | 第19页 |
| 1.4 鹅细小病毒感染的临诊症状及病理变化 | 第19-21页 |
| 1.4.1 临诊症状 | 第19-20页 |
| 1.4.2 病理变化 | 第20-21页 |
| 1.5 鹅细小病毒感染的诊断方法 | 第21-24页 |
| 1.5.1 病毒分离鉴定法 | 第21页 |
| 1.5.2 电子显微镜技术 | 第21页 |
| 1.5.3 血清学检测 | 第21-23页 |
| 1.5.4 分子生物学检测方法 | 第23页 |
| 1.5.5 鉴别诊断 | 第23-24页 |
| 1.6 鹅细小病毒感染的防治措施 | 第24-25页 |
| 1.6.1 生物安全措施 | 第24页 |
| 1.6.2 疫苗免疫与治疗 | 第24-25页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-38页 |
| 2.1 材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 病料 | 第26页 |
| 2.1.2 试验动物 | 第26页 |
| 2.1.3 主要试验试剂和药品 | 第26页 |
| 2.1.4 主要溶液及培养基的配制 | 第26-27页 |
| 2.1.5 引物设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.1.6 主要的试验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-38页 |
| 2.2.1 鹅细小病毒的分离及VP3基因的变异分析 | 第29-31页 |
| 2.2.1.1 鹅细小病毒的分离与增殖 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 鹅细小病毒DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.1.3 PCR扩增及产物鉴定 | 第30页 |
| 2.2.1.4 PCR产物的回收纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.1.5 目的基因与载体的连接 | 第31页 |
| 2.2.1.6 转化 | 第31页 |
| 2.2.1.7 阳性克隆的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.1.8 测序结果的拼接和分析 | 第31页 |
| 2.2.2 TAG13毒株在细胞上传代的研究 | 第31-38页 |
| 2.2.2.1 毒株选取 | 第32页 |
| 2.2.2.2 TAG13株病毒EID50的测定 | 第32页 |
| 2.2.2.3 动物回归试验 | 第32页 |
| 2.2.2.4 病理组织学变化观察 | 第32-33页 |
| 2.2.2.5 抗体水平检测 | 第33-34页 |
| 2.2.2.6 鹅/鸭胚成纤维细胞(GEF/DEF)制备方法 | 第34-35页 |
| 2.2.2.7 GEF/DEF的传代培养及纯化 | 第35页 |
| 2.2.2.8 GEF/DEF的冻存及复苏 | 第35-36页 |
| 2.2.2.9 GPV在GEF/DEF中的培养 | 第36页 |
| 2.2.2.10 GPV在GEF/DEF上的传代培养 | 第36页 |
| 2.2.2.11 不同代次细胞毒TCID50测定 | 第36-37页 |
| 2.2.2.12 不同代次细胞毒对易感雏鹅致病性的研究 | 第37页 |
| 2.2.2.13 不同代次细胞毒全基因组序列扩增及分析 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-53页 |
| 3.1 鹅细小病毒的分离及VP3基因的变异分析 | 第38-44页 |
| 3.1.1 GPV病毒的分离 | 第38页 |
| 3.1.2 PCR扩增结果 | 第38-39页 |
| 3.1.3 分离株VP3基因核苷酸和氨基酸序列的分析与比较 | 第39-41页 |
| 3.1.4 分离株潜在糖基化位点分析 | 第41-42页 |
| 3.1.5 分离株VP3基因遗传进化分析 | 第42-44页 |
| 3.2 TAG13毒株在细胞上传代的研究 | 第44-53页 |
| 3.2.1 TAG13株病毒EID50的测定 | 第44页 |
| 3.2.2 人工感染雏鹅后的临床症状 | 第44-46页 |
| 3.2.3 人工感染后死亡雏鹅的剖检变化 | 第46页 |
| 3.2.4 人工感染雏鹅后病理组织学变化 | 第46-47页 |
| 3.2.5 人工感染雏鹅后抗体水平检测 | 第47-48页 |
| 3.2.6 TAG13株鹅细小病毒在GEF生长下细胞状态 | 第48-49页 |
| 3.2.7 TAG13株不同代次毒力的变化 | 第49页 |
| 3.2.8 不同代次细胞毒对易感雏鹅致病性 | 第49-51页 |
| 3.2.9 TAG13株不同代次病毒全基因组扩增及序列分析 | 第51-53页 |
| 3.2.9.1 传代病毒的全基因组扩增 | 第51页 |
| 3.2.9.2 不同代次同源性进化分析 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 4.1 鹅细小病毒的分离及VP3基因的变异分析 | 第53-54页 |
| 4.2 TAG13毒株在细胞上传代的研究 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
