论文目录 | |
| 中文摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| 1.1 EGY金属蛋白酶研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1.1 金属蛋白酶的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.1.1 金属蛋白酶的特点 | 第14页 |
| 1.1.1.2 锌金属蛋白酶的序列特征 | 第14-15页 |
| 1.1.1.3 锌金属蛋白酶的分类 | 第15页 |
| 1.1.2 质体蛋白酶研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.2.1 蛋白酶的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.1.2.2 质体蛋白酶的功能 | 第16-17页 |
| 1.1.2.3 质体蛋白酶的分类 | 第17页 |
| 1.1.3 EGY金属蛋白酶在植物生长发育及环境胁迫中的功能 | 第17-22页 |
| 1.1.3.1 EGY1金属蛋白酶的发现 | 第17-18页 |
| 1.1.3.2 EGY1金属蛋白酶在质体发育中的功能 | 第18-19页 |
| 1.1.3.3 AMOS1/EGY1质体蛋白酶在铵盐胁迫中的功能 | 第19页 |
| 1.1.3.4 AMOS1/EGY1质体蛋白酶在磷胁迫中的功能 | 第19-20页 |
| 1.1.3.5 EGY1金属蛋白酶在叶片衰老中的功能 | 第20-21页 |
| 1.1.3.6 EGY2金属蛋白酶对于下胚轴伸长的影响 | 第21页 |
| 1.1.3.7 番茄金属蛋白酶L2的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.2 高温对植物的影响 | 第22-23页 |
| 1.2.1 高温对植物生物膜系统的影响 | 第22页 |
| 1.2.2 高温对植物生理及代谢的影响 | 第22-23页 |
| 1.2.3 高温对番茄生长发育的影响 | 第23页 |
| 1.3 乙烯对植物的影响 | 第23-24页 |
| 1.3.1 乙烯的生物合成过程 | 第23-24页 |
| 1.3.2 乙烯对植物种子休眠及萌发、开花和果实形成的影响 | 第24页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 材料的培养与处理 | 第26页 |
| 2.1.3 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.1.4 酶及各种试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.5 引物 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-46页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.2 第一链cDNA的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.3 SlEGY2基因的克隆及分离 | 第30-31页 |
| 2.2.3.1 目的片段的扩增 | 第30页 |
| 2.2.3.2 目的片段的回收 | 第30-31页 |
| 2.2.4 克隆载体的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.4.1 目的片段与克隆载体的连接 | 第31-32页 |
| 2.2.4.2 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.2.4.3 大肠杆菌的转化 | 第32-33页 |
| 2.2.4.4 菌落PCR的筛选及鉴定 | 第33页 |
| 2.2.4.5 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.4.6 重组克隆载体的酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.2.5 表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.6 农杆菌介导的遗传转化 | 第35-37页 |
| 2.2.6.1 根癌农杆菌LBA4404和GV3101感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.6.2 农杆菌的转化 | 第36页 |
| 2.2.6.3 农杆菌介导法转化番茄 | 第36-37页 |
| 2.2.7 转基因植株的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.7.1 CTAB法提取植物叶片基因组DNA | 第37页 |
| 2.2.7.2 转基因植株的筛选 | 第37-38页 |
| 2.2.8 SlEGY2蛋白的亚细胞定位 | 第38-39页 |
| 2.2.8.1 SlEGY2-GFP载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.2.8.2 瞬时转化本生烟 | 第39页 |
| 2.2.9 生理指标的测定 | 第39-42页 |
| 2.2.9.1 H_2O_2和O_2~(·?)的测定及染色分析 | 第39-40页 |
| 2.2.9.2 CAT和APX酶活性的测定 | 第40-41页 |
| 2.2.9.3 台盼蓝染色分析 | 第41页 |
| 2.2.9.4 膜脂过氧化程度和电解质外渗量的测定 | 第41-42页 |
| 2.2.9.5 乙烯含量的测定 | 第42页 |
| 2.2.9.6 叶绿素含量的测定 | 第42页 |
| 2.2.10 叶绿体类囊体膜蛋白的提取及Westernblot分析 | 第42-45页 |
| 2.2.10.1 叶绿体类囊体膜蛋白的提取 | 第43页 |
| 2.2.10.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43-44页 |
| 2.2.10.3 Western分析 | 第44-45页 |
| 2.2.11 数据的处理与分析 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-62页 |
| 3.1 SlEGY2基因的分离及序列分析 | 第46-48页 |
| 3.1.1 SlEGY2基因全长cDNA序列的克隆 | 第46页 |
| 3.1.2 SlEGY2基因的序列分析 | 第46-48页 |
| 3.2 SlEGY2蛋白的亚细胞定位 | 第48页 |
| 3.3 SlEGY2基因在番茄中的表达分析 | 第48-50页 |
| 3.3.1 SlEGY2基因在番茄不同器官中的表达分析 | 第48-49页 |
| 3.3.2 SlEGY2基因诱导表达分析 | 第49-50页 |
| 3.4 SlEGY2在番茄中的遗传转化 | 第50-52页 |
| 3.4.1 SlEGY2基因反义表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.4.2 SlEGY2在番茄中的遗传转化及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.5 抑制SlEGY2基因的表达降低了转基因番茄的高温抗性 | 第52-53页 |
| 3.6 抑制SlEGY2基因的表达对番茄光合参数的影响 | 第53-55页 |
| 3.6.1 抑制SlEGY2基因的表达降低了转基因番茄的叶绿素含量 | 第53-54页 |
| 3.6.2 抑制SlEGY2基因的表达加剧了转基因番茄的光抑制程度 | 第54-55页 |
| 3.7 抑制SlEGY2基因的表达对番茄体内活性氧的影响 | 第55-57页 |
| 3.7.1 抑制SlEGY2基因的表达增加了高温胁迫下番茄体内活性氧的积累 | 第55-56页 |
| 3.7.2 抑制SlEGY2基因的表达降低了高温胁迫下番茄体内抗氧化酶的活性 | 第56-57页 |
| 3.8 抑制SlEGY2基因的表达增加了高温胁迫下番茄细胞膜的伤害程度 | 第57-58页 |
| 3.9 抑制SlEGY2基因的表达对番茄幼苗的影响 | 第58-62页 |
| 3.9.1 抑制SlEGY2基因的表达降低了番茄幼苗下胚轴的长度 | 第58-60页 |
| 3.9.2 抑制SlEGY2基因的表达增加了番茄幼苗内源乙烯的含量 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-65页 |
| 4.1 SlEGY2基因的序列和表达模式分析 | 第62页 |
| 4.2 抑制SlEGY2基因的表达降低了番茄的高温抗性 | 第62-64页 |
| 4.3 抑制SlEGY2基因的表达对番茄生长发育的影响 | 第64-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第75页 |
