论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 1 前言 | 第15-22页 |
| 1.1 防御素的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.1.1 防御素的定义和分类 | 第15-16页 |
| 1.1.1.1 植物防御素 | 第15页 |
| 1.1.1.2 无脊椎动物防御素 | 第15-16页 |
| 1.1.2 防御素的生物学作用和机制 | 第16-18页 |
| 1.1.2.1 抗菌作用及其机制 | 第16-17页 |
| 1.1.2.2 抗病毒作用及其机制 | 第17页 |
| 1.1.2.3 抗肿瘤作用及其机制 | 第17页 |
| 1.1.2.4 其他生物学作用 | 第17-18页 |
| 1.2 禽β-防御素(AvBD)的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 禽β-防御素分子结构 | 第18页 |
| 1.2.2 禽β-防御素生物学特性 | 第18-19页 |
| 1.2.3 禽β-防御素蛋白的表达 | 第19页 |
| 1.2.4 禽β-防御素研究展望 | 第19-20页 |
| 1.3 禽肿瘤病病毒研究现状 | 第20-22页 |
| 1.3.1 ALV-J病毒 | 第20页 |
| 1.3.2 REV病毒 | 第20-21页 |
| 1.3.3 MDV病毒 | 第21-22页 |
| 1.4 本研究目的和意义 | 第22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-39页 |
| 2.1 材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 菌种、病毒和质粒载体 | 第22页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.6 实验地点 | 第25页 |
| 2.2 AvBD2和AvBD6基因的克隆与序列分析 | 第25-29页 |
| 2.2.1 组织总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.2 AvBD2和AvBD6引物设计和合成 | 第25-26页 |
| 2.2.3 目的基因的获取 | 第26-28页 |
| 2.2.3.1 1.5％琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.2.3.2 目的片段的回收纯化 | 第26-28页 |
| 2.2.4 感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.2.5 连接产物转化 | 第28-29页 |
| 2.3 重组AvBD2和重组AvBD6的原核表达 | 第29-32页 |
| 2.3.1 重组AvBD2和重组AvBD6在大肠杆菌中的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.3.2 包涵体的提取和纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.3 纯化蛋白的Westernblot验证 | 第31-32页 |
| 2.3.3.1 蛋白浓度检测 | 第31-32页 |
| 2.3.3.2 Westernblot实验 | 第32页 |
| 2.4 重组AvBD2和重组AvBD6蛋白体外抗禽肿瘤病病毒 | 第32-37页 |
| 2.4.1 原核表达重组AvBD蛋白的复性 | 第32-33页 |
| 2.4.2 ALV-J、REV、MDV病毒实时荧光定量PCR引物设计和合成 | 第33页 |
| 2.4.3 复性AvBD2和AvBD6体外抗禽肿瘤病病毒检测 | 第33-37页 |
| 2.4.3.1 鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第33-34页 |
| 2.4.3.2 复性AvBD2和AvBD6对细胞的增殖-毒性检测 | 第34页 |
| 2.4.3.3 AvBD2和AvBD6体外抗禽肿瘤病病毒qPCR检测 | 第34-36页 |
| 2.4.3.4 AvBD2和AvBD6体外抗禽肿瘤病病毒Westernblot检测 | 第36-37页 |
| 2.5 重组AvBD2和重组AvBD6蛋白体内抗ALV-J病毒 | 第37-39页 |
| 2.5.1 体内分组设计 | 第37页 |
| 2.5.2 病料采集 | 第37页 |
| 2.5.3 制作常规石蜡切片及病理组织学观察 | 第37-38页 |
| 2.5.4 血液血涂片制作及血液学观察 | 第38-39页 |
| 3 实验结果与分析 | 第39-56页 |
| 3.1 鸡AvBD2、AvBD6基因获取与分析 | 第39-41页 |
| 3.1.1 禽β-防御素基因的克隆 | 第39-40页 |
| 3.1.2 鸡AvBD2、AvBD6序列对比 | 第40-41页 |
| 3.2 鸡AvBD2、AvBD6原核表达载体构建 | 第41-42页 |
| 3.3 鸡AvBD2、AvBD6基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第42-45页 |
| 3.3.1 鸡AvBD2、AvBD6的SDS-PAGE检测 | 第42-44页 |
| 3.3.2 鸡AvBD2、AvBD6的Westernblot检测 | 第44-45页 |
| 3.3.2.1 BCA法测定蛋白浓度 | 第44-45页 |
| 3.3.2.2 Westernblot检测 | 第45页 |
| 3.4 AvBD2、AvBD6蛋白体外抗禽肿瘤病毒 | 第45-50页 |
| 3.4.1 复性AvBD蛋白对细胞CCK-8毒性检测 | 第45-46页 |
| 3.4.2 AvBD2、AvBD6蛋白体外抗禽肿瘤病毒效果qPCR检测 | 第46-48页 |
| 3.4.3 AvBD2、AvBD6蛋白体外抗禽肿瘤病毒Westernblot检测 | 第48-50页 |
| 3.5 AvBD2、AvBD6蛋白体内抗ALV-J感染 | 第50-56页 |
| 3.5.1 剖检大体器官观察 | 第50-51页 |
| 3.5.2 病理组织学观察 | 第51-54页 |
| 3.5.3 血液学血相观察 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |
