论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 1 前言 | 第16-28页 |
| 1.1 REV 研究进展 | 第16-22页 |
| 1.1.1 病原学 | 第16-18页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第18-19页 |
| 1.1.3 传播方式 | 第19-20页 |
| 1.1.4 致病机理 | 第20页 |
| 1.1.5 症状 | 第20-21页 |
| 1.1.6 病理变化 | 第21页 |
| 1.1.7 诊断 | 第21-22页 |
| 1.1.8 防治措施 | 第22页 |
| 1.2 单克隆抗体技术的应用 | 第22-24页 |
| 1.2.1 单克隆抗体技术的基本原理 | 第23页 |
| 1.2.2 单克隆抗体的特点 | 第23页 |
| 1.2.3 单克隆抗体的应用 | 第23-24页 |
| 1.3 逆转录酶抑制剂类药物齐多夫定(AZT) | 第24-25页 |
| 1.4 基因工程亚单位疫苗的研究进展 | 第25页 |
| 1.5 疫苗免疫佐剂的研究进展 | 第25-27页 |
| 1.5.1 疫苗免疫佐剂概述 | 第25-26页 |
| 1.5.2 免疫佐剂的功能 | 第26页 |
| 1.5.3 免疫佐剂作用机理 | 第26-27页 |
| 1.5.4 CpG-ODN | 第27页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-47页 |
| 2.1 材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 毒株与细胞 | 第28页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第28页 |
| 2.1.3 佐剂 | 第28页 |
| 2.1.4 实验动物及饲养设施 | 第28页 |
| 2.1.5 主要仪器和试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.6 主要试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-47页 |
| 2.2.1 REVgp90蛋白的表达 | 第30-36页 |
| 2.2.1.1 gp90基因的扩增 | 第30页 |
| 2.2.1.2 gp90基因的回收纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.1.3 gp90基因的连接 | 第31页 |
| 2.2.1.4 gp90基因的转化 | 第31页 |
| 2.2.1.5 PET28a-gp90质粒的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.1.6 PET28a-gp90质粒的提取 | 第32页 |
| 2.2.1.7 PET28a-gp90质粒的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.1.8 gp90基因的诱导表达 | 第33页 |
| 2.2.1.9 gp90蛋白的电泳鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.1.10 gp90蛋白的Western-blot分析 | 第35页 |
| 2.2.1.11 重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.2 检测REV抗体的间接ELISA方法的建立 | 第36-37页 |
| 2.2.2.1 间接ELISA方法的初步建立 | 第36-37页 |
| 2.2.2.2 ELISA反应条件的优化 | 第37页 |
| 2.2.3 抗REV-gp90蛋白单克隆抗体的制备 | 第37-41页 |
| 2.2.3.1 BALB/c小鼠的免疫 | 第37-38页 |
| 2.2.3.2 饲养层细胞的制备 | 第38页 |
| 2.2.3.3 脾细胞的制备 | 第38页 |
| 2.2.3.4 脾细胞与杂交瘤细胞的融合 | 第38-39页 |
| 2.2.3.5 杂交瘤细胞的筛选 | 第39页 |
| 2.2.3.6 杂交瘤细胞的克隆化 | 第39-40页 |
| 2.2.3.7 单克隆抗体腹水制备 | 第40页 |
| 2.2.3.8 单克隆抗体的效价检测 | 第40-41页 |
| 2.2.4 AZT和单克隆抗体联合应用去除疫苗毒种中REV的污染 | 第41-44页 |
| 2.2.4.1 AZT和McAb对REV抑制作用 | 第41-42页 |
| 2.2.4.2 AZT和McAb联合应用去除疫苗毒种中REV的污染 | 第42-43页 |
| 2.2.4.3 毒种纯净度的IFA检测 | 第43页 |
| 2.2.4.4 毒种纯净度的SPF鸡检测 | 第43-44页 |
| 2.2.5 gp90蛋白协同分子佐剂CpG-ODN诱导母源抗体保护雏鸡抵抗REV的感染 | 第44-47页 |
| 2.2.5.1 毒株的增殖 | 第44页 |
| 2.2.5.2 毒株TCID50的测定 | 第44页 |
| 2.2.5.3 人工模拟试验的设计 | 第44-45页 |
| 2.2.5.4 母鸡REV抗体水平的检测 | 第45页 |
| 2.2.5.5 体重记录 | 第45页 |
| 2.2.5.6 REV病毒血症的检测 | 第45-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-56页 |
| 3.1 REVgp90蛋白的表达 | 第47-50页 |
| 3.1.1 PET28a-gp90原核表达质粒的构建与鉴定 | 第47-48页 |
| 3.1.1.1 PCR扩增gp90基因 | 第47页 |
| 3.1.1.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| 3.1.1.3 重组质粒的序列测定 | 第48页 |
| 3.1.2 gp90基因的表达 | 第48-50页 |
| 3.1.2.1 SDS-PAGE分析 | 第48-49页 |
| 3.1.2.2 Western-blot分析 | 第49-50页 |
| 3.2 检测抗体的间接ELISA方法的建立 | 第50页 |
| 3.3 抗REV-gp90蛋白单克隆抗体的制备 | 第50-52页 |
| 3.3.1 BALB/c小鼠的免疫 | 第50-51页 |
| 3.3.2 细胞融合与筛选 | 第51页 |
| 3.3.3 单克隆抗体腹水制备与效价检测 | 第51-52页 |
| 3.4 AZT和单克隆抗体联合应用去除疫苗毒种中REV的污染 | 第52-53页 |
| 3.4.1 AZT和McAb对REV在细胞复制的抑制作用 | 第52-53页 |
| 3.4.2 AZT和McAb联合应用去除疫苗毒种中REV的污染 | 第53页 |
| 3.4.3 净化后毒种的检验 | 第53页 |
| 3.5 gp90蛋白协同分子佐剂CpG-ODN诱导母源抗体保护雏鸡抵抗REV的感染 | 第53-56页 |
| 3.5.1 重组蛋白与CpG-ODN共免疫SPF母鸡后REV抗体反应 | 第53-54页 |
| 3.5.2 雏鸡母源抗体对抵抗REV感染的保护作用 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 单克隆抗体的制备及与AZT联合应用去除疫苗毒种中REV的污染 | 第56-57页 |
| 4.2 gp90蛋白协同分子佐剂CpG-ODN诱导母源抗体保护雏鸡抵抗REV的感染 | 第57-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-71页 |
| 7 致谢 | 第71-72页 |
| 8 硕士期间论文发表情况 | 第72页 |
