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拟南芥HRD3A基因调节种子发育的机制研究

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拟南芥HRD3A基因调节种子发育的机制研究
论文目录
 
符号说明第1-8页
中文摘要第8-9页
Abstract第9-11页
1 前言第11-26页
  1.1 种子的发育过程第11-17页
    1.1.1 胚乳的发育第12页
    1.1.2 种皮的发育第12-13页
    1.1.3 胚的发育第13-14页
    1.1.4 胚、胚乳之间的相互作用第14-15页
    1.1.5 胚乳和种皮的相互作用第15-17页
  1.2 种子发育大小的调控第17-23页
    1.2.1 影响胚发育的途径第17页
    1.2.2 影响胚乳发育的途径第17-19页
    1.2.3 影响种皮发育的途径第19-22页
    1.2.4 其他途径(生长素)第22-23页
  1.3 HRD3A在植物发育中的作用第23-24页
    1.3.1 HRD3A参与内质网胁迫反应第23-24页
    1.3.2 HRD1/HRD3A复合体的物理结构第24页
  1.4 本研究的目的及意义第24-26页
2 实验材料与方法第26-41页
  2.1 实验材料第26-27页
    2.1.1 植物材料及生长条件第26页
    2.1.2 菌株和质粒第26页
    2.1.3 酶、生化试剂第26-27页
      2.1.3.1 酶及试剂盒第26页
      2.1.3.2 生化试剂第26-27页
    2.1.4 PCR引物合成第27页
  2.2 实验方法第27-41页
    2.2.1 突变体的鉴定第27-28页
      2.2.1.1 SDS法提取拟南芥的基因组DNA第27-28页
      2.2.1.2 PCR扩增第28页
    2.2.2 突变体植株中相关基因的RT-PCR第28-31页
      2.2.2.1 总RNA的提取第28-30页
      2.2.2.2 检测所提RNA的质量和浓度第30页
      2.2.2.3 RNA反转录cDNA第一链的合成第30-31页
      2.2.2.4 RT-PCR反应第31页
    2.2.3 构建转基因表达载体第31-36页
      2.2.3.1 设计PCR引物第31-32页
      2.2.3.2 PCR扩增目的基因片段第32页
      2.2.3.3 DNA目的片段的回收第32-33页
      2.2.3.4 连接克隆载体与DNA目的片段第33页
      2.2.3.5 Inoue法制备大肠杆菌感受态细胞第33-34页
      2.2.3.6 转化大肠杆菌感受态细胞第34页
      2.2.3.7 大肠杆菌的菌落PCR验证第34-35页
      2.2.3.8 DNA序列的测定第35页
      2.2.3.9 质粒DNA的提取第35页
      2.2.3.10 质粒DNA的酶切第35-36页
      2.2.3.11 连接目的DNA片段与质粒DNA片段第36页
    2.2.4 农杆菌浸染法介导的拟南芥遗传转化第36-38页
      2.2.4.1 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备第36-37页
      2.2.4.2 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的转化第37页
      2.2.4.3 农杆菌介导的拟南芥遗传转化第37-38页
    2.2.5 拟南芥的种植第38页
      2.2.5.1 拟南芥种子的处理第38页
      2.2.5.2 拟南芥苗期管理第38页
    2.2.6 HRD3A基因在拟南芥种子发育过程中的组织定位第38-40页
      2.2.6.1 GUS染色第39页
      2.2.6.2 DIC观察拟南芥基因HRD3A在种子发育过程中的表达第39-40页
    2.2.7 RNA文库的构建第40页
    2.2.8 Illumina测序第40页
    2.2.9 差异表达基因GO功能分析第40页
    2.2.10 基因表达量分析第40-41页
3 结果与分析第41-58页
  3.1 hrd3a的表型分析第41-46页
    3.1.1 hrd3a突变体的鉴定第41页
    3.1.2 hrd3a突变体表型分析第41-44页
    3.1.3 hrd3a-1突变体的表型互补第44-46页
  3.2 HRD3A的组织表达分析第46-47页
  3.3 hrd3a-1变突体细胞变小第47-49页
  3.4 HRD3A通过母性组织影响种子大小第49-50页
  3.5 hrd3a-1突变体种子中差异表达基因的分析第50-58页
    3.5.1 hrd3a-1转录组测序分析第50-53页
    3.5.2 hrd3a-1种子中差异表达基因的功能分类分析第53-58页
      3.5.2.1 hrd3a-1突变体KEGGpathway分析第55-56页
      3.5.2.2 HRD3A调控生长素响应因子ARF家族成员的转录第56页
      3.5.2.3 HRD3A调控细胞色素家族成员的转录第56-58页
4 讨论第58-60页
5 结论第60-61页
参考文献第61-68页
致谢第68页

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